一、Sensitivity of sperm motility assay for detecting endotoxin effect on human sperm in vitro（论文文献综述）
袁启龙[1]（2020）在《益肾活血饮改善肾虚血瘀证VC患者SDF及胚胎质量的随机对照研究》文中研究表明目的:通过前瞻性随机对照研究方法,评估益肾活血饮能否改善肾虚血瘀证精索静脉曲张（Varicocele,VC）不育患者精子DNA碎片率（Sperm DNA fragmentation,SDF）,及后续行体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization and embryo transplantation,IVF-ET）治疗所获得的胚胎质量,并评估该方剂临床应用的安全性,以及与既往专家共识推荐干预方式相比是否存有其优势。方法:收集就诊于广东省中医院生殖医学科拟行辅助生殖技术助孕治疗的SDF异常不育症患者,常规行助孕治疗术前套餐检查,对阴囊彩超显示轻中度精索静脉曲张且精子参数符合IVF治疗方案的SDF异常患者给予中医证型辨识,挑选出肾虚血瘀证精索静脉曲张性SDF异常患者。计划纳入研究目标人群120例,根据随机数字表法分为三组,即益肾活血饮组39例（生活方式调整+益肾活血饮治疗）、维生素E组37例（生活方式调整+维生素E治疗）和空白对照组44例（生活习惯调整）。各组分别给予三个月上述干预措施,后续进入IVF-ET治疗周期,配偶取卵日男方精液采用密度梯度离心法优化处理。临床实施干预前,统计上述三组患者年龄、精液常规参数和SDF,比较三组上述指标是否存有差异,以评估治疗前三组基础值是否均一具有可比性;临床干预后,三组各自内部干预前后配对比较精液常规参数和SDF是否存有差异,评估三组干预措施是否具有临床治疗效果;临床干预后,分析三组间精液常规参数和SDF指标是否存有差异;比较三组措施干预后行IVF-ET助孕治疗获取的胚胎各阶段评估指标（受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优质胚胎率）有无区别,并记录有无不良事件发生。通过比较上述各评估参数的变化,以分析三种干预措施的临床治疗效能是否存有差异,从而确认益肾活血饮治疗肾虚血瘀证精索静脉曲张性精子DNA碎片异常患者的临床疗效和安全性是否优于或等效于其它干预方案。结果:（1）实际纳入目标人群108例,其中益肾活血饮组36例,维生素E组35例,空白对照组37例,干预过程中益肾活血饮组脱落1例,空白对照组脱落2例;（2）患者夫妇双方年龄、不育年限、配偶获卵数、成熟卵泡数、治疗前精液常规参数和精子DNA碎片率,三组间比较均无显着差异,各组间精液治疗效果和胚胎发育潜能影响评估均具有可比性;（3）各组指标内部治疗前后配对比较,三组精子功能指标SDF较治疗前均有显着改善,z值分别为-13.105,-6.829和-6.697,差异均有统计学意义,所有P<0.001,精液常规单项和总体参数各组有不同程度改善;（4）治疗后三组间精液参数（包括SDF）比较,精液常规单项指标和精子总体参数三组间均无统计学差异,SDF存有显着差异,=3.37,P=0.038,多重比较发现中药组和空白对照组差异存在统计学差异（P=0.048）;（5）三组SDF改善率分别为62.857%、42.857%和37.143%,=5.116（P=0.077）,治愈率分别为45.714%、31.429%和31.429%,=2.062（P=0.357）,虽有差异,但均无统计学差异（P>0.05）;（6）治疗后SDF正常患者和异常患者胚胎培养室参数（受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率和优质胚胎率）比较,可利用胚胎率（z=4.889,P<0.001）、优质胚胎率（z=6.148,P<0.001）和正常受精率（z=3.373,P=0.001）差异有统计学意义,其它指标均未见统计学差异;（7）三组间IVF治疗所获取胚胎各发育阶段参数比较,受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率均无统计学差异,而优质胚胎率存有统计学差异（=17.233,P<0.001）,多重比较发现中药组与维生素E组和空白对照组差异均存有统计学差异（均P<0.05）,维生素E治疗组和空白对照组优质胚胎率无统计学差异。（8）三组肾虚血瘀证型改善率比较,益肾活血饮组改善率82.857%（29/35）,维生素E组57.143%（20/35）,空白对照组51.429%（18/35）,各组证型改善率存有显着差异,益肾活血饮干预组证型改善率显着优于其它两组。（9）安全性分析显示,各组干预措施均未见严重不良反应/事件发生,益肾活血饮组1例患者大便稍稀软,常规检查血常规、肝肾功各组均未见异常。结论:SDF异常可影响到胚胎的发育潜能,SDF异常患者正常受精率、可利用胚胎率和优质胚胎率偏低,针对肾虚血瘀证精索静脉曲性SDF异常患者的临床经验治疗（包括单独生活方式调整）,均可有效改善此类患者的SDF和精液常规参数,但呈现SDF参数治疗效果的差异性,相对于生活方式的调整和抗组织氧化应激反应的维生素E治疗,多环节作用效应的益肾活血饮干预可获得相对较低的SDF和较高的优质胚胎率,预示该类SDF异常患者行IVF治疗前采用合适的保守预处理存在其必要性,中医药干预在该类患者诊治方面存在其优势。
施文[2]（2020）在《在稀释液中添加虾青素对鸡精液保存效果影响的研究》文中研究表明现代化种鸡养殖场为了减少公鸡的饲养数量、提高配种受精率和生产效率,普遍采用人工授精技术辅助鸡场繁殖。然而,人工采集出来的精液随着保存时间的延长,精液活性氧（ROS）水平升高,精子发生氧化应激,最终导致其活力下降甚至凋亡,直接影响受精率。许多研究表明,具备较好抗氧化损伤能力的稀释液可以有效降低精子的氧化损伤水平,有助于保持精子活力。因此,本研究在鸡的精液稀释液中添加不同浓度的虾青素——一种较强的天然抗氧化剂,对低温或常温保存后的精子进行了一系列的检测,包括精子活力、畸形率、顶体和头尾部质膜完整率、ATP含量、乳酸脱氢酶（LDH）活性、总抗氧化能力（T-AOC）、ROS,丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）和受精率等;并将得到最佳浓度虾青素稀释液后与添加番茄红素（0.2mg/m L）稀释液进行比较,为改进鸡精液稀释液、提高种鸡人工授精效率奠定基础。本研究主要结果如下:首先,在低温保存（4℃）条件下,精液稀释液中添加虾青素可提高贮藏精液质量,虾青素组精子活力（0.20μg/m L,20.73±0.95%）、顶体完整率、头尾质膜完整率、LDH活性和ATP含量均高于对照组（P<0.05）;0.35μg/m L虾青素添加组中精液的精子畸形率在第5d时高于对照组（P<0.05）,T-AOC、ROS、SOD、CAT、GSH-PX和MDA指标均优于对照组。0.20μg/m L虾青素添加组的受精率最高（63.25±4.42%）。其次,在常温（25～30℃）条件下,虾青素组的精子活力（0.20μg/m L,19.13±2.26%）、顶体完整率、头尾部质膜完整率、LDH活性和ATP含量均高于对照组（P<0.05）;虾青素添加组中的精液T-AOC、ROS和MDA指标较优（P<0.05）;在0.20μg/m L虾青素添加组中的精液SOD、GSH-PX和CAT指标最优（P<0.05）。使用采出后稀释的精液进行人工授精,0.20μg/m L虾青素添加组的受精率最高（93.23±4.80%）。最后,本研究使用0.20μg/m L虾青素稀释液与0.2mg/m L番茄红素稀释液进行比较,结果显示在低温条件下保存5d的虾青素添加组中精液的精子质膜完整率高于番茄红素组（P<0.05）,但CAT活性低于番茄红素组。两组精子活力、顶体完整率,T-AOC、ROS指标均无显着差异。在常温条件下保存2d的虾青素添加组中精液的精子活力（21.43±4.83%）、顶体、质膜完整率,T-AOC均高于番茄红素组（P<0.05）,CAT活性低于番茄红素组。两组精子ROS水平均无显着差异。综上所述,公鸡精液稀释液中添加的虾青素可以增强精液的抗氧化性,进而提升精液质量,本研究结果表明当虾青素的最佳添加浓度为0.20μg/m L,精子质量和受精率均有提高。与添加0.2 mg/m L番茄红素稀释液相比,添加0.20μg/m L虾青素稀释液在精子质膜完整性和T-AOC等参数优于前者,对精液保存效果更好。本研究结果将为虾青素作为强抗氧化剂在鸡精液保存稀释液中的应用提供理论依据。
阿娜尔[3]（2020）在《蒙古马精液冷冻保存的研究》文中提出蒙古马是世界上古老的品种,也是优秀的地方品种。通过冷冻精液人工授精技术可以加快蒙古马提纯复壮及提高本品种选育进程。由于农业机械化的推进及国内对马繁殖技术关注度的下降,目前还没有人对蒙古马精子的冷冻保存方法进行过系统的研究,仍未探索到一种成熟有效并可推广到生产实践中的冷冻保存技术程序。为了研究出在实际生产中能够推广应用的蒙古马精液冷冻保存方法,进一步完善蒙古马冷冻精液品质,本研究对蒙古马精液冷冻程序及冷冻保护液配方的进行了优化,同时,使用最优冷冻保护液配方和冷冻保护程序对蒙古马精液进行了冷冻,并开展了人工授精受胎率验证试验,其结果如下:（1）将蒙古马精子置于不同渗透压（30、50、100、200、240、300、360、420、480、550、600mOsm/kg）的盐水溶液中孵育后,测定其前进运动精子百分比（PM）和精子质膜完整率（MI）。结果显示,蒙古马精子渗透压耐受范围为200～400mOsm/kg,从此渗透压再回到等渗状态时,其活力是可以恢复的,而渗透压超出这一范围其活力恢复能力降低。2)比较了沉降离心法之不同离心力和离心时间（400 g,15 min;600 g,10 min;1000 g,7 min）和缓冲离心法（使用商品化离心垫）对蒙古马精液冻前冻后精液质量和精子损失率的影响,结果显示,600 g,10 min组离心方法获得的精液冷冻前后TM、PM、VAP、VSL、MI和精子损率均与使用离心垫进行离心的对照组无显着差异（P<0.05）,该方法可代替商品化离心垫使用。（3）比较了不同平衡时间（0 min、100 min和120 min）、不同冷冻降温速率（液氮熏蒸高度2 cm、3 cm和4 cm）对蒙古马精液冷冻效果的影响,结果显示,蒙古马精液冷冻之前需进行一段时间的冷却平衡。获得可接受的解冻后质量最佳平衡时间是应将蒙古马精子冷却至4℃并平衡100 min。距离液氮面高度3 cm的熏蒸高度获得的冷冻效果与程序化冷冻仪相当。（4）以INRA82+2%卵黄基础液,添加4种不同浓度甘油（2%、3%、4%和5%）和二甲基甲酰胺（4%、5%、6%和7%）作为冷冻保护剂对蒙古马精液进行冷冻,分别测定了在4℃平衡100 min后的质量指标和冷冻-解冻后的质量指标。结果显示,冷冻-解冻后,3%gly、4%gly、5%gly和7%DMF组TM和PM均显着高于其他组（P<0.05）;添加2%gly组、3%gly组和7%DMF组MI显着高于其他组（P<0.05）。综合考虑TM和MI,蒙古马精液冷冻保护液中适宜甘油比例为3.0%。（5）比较了 8种不同冷冻保护液:INRA82基础液+5种不同浓度低密度脂蛋白（LDL,0.5%、1%、2%、3%和 5%）,INRA82 基础液+2%卵黄,INRA82 基础液+2%离心卵黄和INRAFreeze商品稀释液对蒙古马精液冷冻效果的影响。以上冷冻保护液均添加了 3%甘油。结果显示,在冷冻-解冻后,2%LDL、2%卵黄和INRAFreeze组TM、PM、VAP、VSL、VCL、MI和AI均显着高于其他组（P<0.05）。表明,2%的LDL和2%的卵黄对蒙古马精子可能具有低温保护作用,2%的卵黄提取步骤简单,更容易获得。（6）在脱脂奶基础液上,选择4种不同浓度的葡萄糖（0、67、125和147 mM）与270mM乳糖、50mM棉子糖组合,制备成精子低温保存稀释液,比较了其对蒙古马精液冷藏保存的效果。结果显示,125 mM葡萄糖+270 mM乳糖对蒙古马精液低温保存质量有显着提高作用。（7）以INRA82作为基础稀释液,分别添加谷胱甘肽（0、5、7、10和20mg/mL）、海藻糖（0、25、35和50 mg/mL）和联合添加谷胱甘肽+海藻糖（0+0、5+35、5+50、7+35和7+50mg/mL）制备成含有不同氧化剂的冷冻保护液,将浓缩处理后的马精子分别置于上述稀释液中稀释、冷冻和解冻,利用精子常规品质检测方法和酶联免疫分析法,检测精子常规品质和抗氧化相关指标。结果显示:1)5 mg/mL谷胱甘肽对精子TM、PM和MI均有提高,可降低精液中MDA含量,添加谷胱甘肽可显着提高CAT和GSH-PX活性（P<0.05）;35和50mg/mL海藻糖可提高TM、PM、AI和MI,且35 mg/mL海藻糖可显着降低MDA含量（P<0.05）;2)联合添加5mg/mL谷胱甘肽+35 mg/mL海藻糖可显着提升马精液的TM、PM、AI和MI（P<0.05）,还可显着降低MDA含量（P<0.05）,提高SOD活性和GSH-PX活性。综上,联合添加5 mg/mL谷胱甘肽+35 mg/mL海藻糖一定程度上可通过改变酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高了马冷冻-解冻后精液质量。（8）在以上研究基础上,筛选出一套自配冷冻保护液配方和简便冷冻程序,将自配冷冻保护液组、INRAFrezee组、鲜精INRA96稀释组处理的精液用于30匹母马共60个排卵周期进行人工授精,通过妊娠检查,进行受胎率统计。结果表明,鲜精人工授精受胎率为70%,INRAFreeze冻精人工授精受胎率为50%;自配冷冻保护液冻精人工授精受胎率为50%。综上所述,经过筛选的自配蒙古马精液冷冻保护液成本低廉、制备步骤少、简单易操作,制备条件温和易控制,冻后活力在35%以上,情期受胎率达到了 50%,能够满足生产需要。
海超[4]（2020）在《褪黑素对牛冷冻保存精子的蛋白质组学研究》文中研究说明精液的冷冻保存是加快新品种选育以及保护优良种畜资源的重要手段。但是冻后精子受精能力严重受损且个体差异极大是冷冻精液生产面临的共性问题。褪黑素具有很强的抗氧化作用,通过清除精子细胞内过量的活性氧,实现提高冻后精子质量。本论文通过对冷冻前、冷冻后以及添加褪黑素冷冻后精子样品进行同步的蛋白质组学以及磷酸化蛋白质组学研究,探讨精子冷冻损伤的分子机制以及褪黑素在精子冷冻中发挥作用的分子机制。本论文系统地研究了不同样品制备方法对牛精子蛋白质组学研究的影响。以安格斯牛冷冻精子为实验材料,用5种不同的裂解液提取精子蛋白质后分别用3种不同的酶解方式获得多肽段,通过LC-MS/MS系统采用同样的方法获得质谱数据。实验结果显示:牛精子蛋白质提取能力BS最强,BU最弱;BT、BR以及BD相当。但是BS-FASP不适用于牛精子蛋白质组学研究。通过胶内酶解鉴定到的蛋白质均多于FASP法,但是胶内酶解操作过程复杂繁琐,耗时长。基于BD的溶液内酶解法鉴定到的蛋白质数量最多,膜蛋白提取鉴定能力较强,且操作时间最短,是较为理想的样品制备方法。通过蛋白质组学技术分别对冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后蒙古牛和鲁西牛精子样品进行蛋白质组学以及磷酸化蛋白质组学研究,结果显示精液的冷冻-解冻过程严重影响了精子线粒体氧化磷酸化过程,线粒体内膜呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ部分蛋白、线粒体膜孔道蛋白VDAC2、PPIF,以及Cytochrome C表达量都增加,而线粒体膜孔道的变化使得Cytochrome C从线粒体内膜释放到细胞质,引起凋亡。适当浓度褪黑素（10-66 M）的添加使以上蛋白的变化程度减小,使精子受到的冷冻损伤降低;但是高浓度的褪黑素（10-33 M）会损伤精子活力。研究中发现热休克蛋白HSP90B1在冻融后精子中表达量下降,添加10-66 M褪黑素后其下降程度减小,但添加10-33 M褪黑素后HSP90B1大幅度下降,与精子活力活力数据相一致,说明褪黑素对冷冻精子的保护作用可能与HSP90B1蛋白有关。磷酸化蛋白质组学研究结果显示:精液的冷冻-解冻使精子蛋白质的磷酸化水平显着升高。这些磷酸化变化的蛋白KEGG主要富集到糖酵解/糖异生能量通路,蛋白质磷酸化修饰在精子应激调控中发挥着重要作用。合适浓度褪黑素的添加可以有效地抑制冷冻-解冻过程中精子蛋白质磷酸化修饰的改变。精子蛋白质组学研究结果显示:蒙古牛鉴定到的蛋白质数多于鲁西牛,差异蛋白主要是顶体囊泡相关蛋白。冷冻前与冷冻后精子差异蛋白质数以及磷酸化肽段数鲁西牛显着高于蒙古牛,从分子层面证实蒙古牛精子冷冻损伤率更低。差异磷酸化肽段的motif富集结果显示:对于鲁西牛冷冻后与冷冻前精子差异磷酸化肽段富集到的motif主要有4个,添加褪黑素冷冻后与冷冻前精子差异磷酸化肽段富集到的motif减少为1个且与蒙古牛冷冻后与冷冻前差异磷酸化肽段motif富集结果相似。因此褪黑素在精子冷冻中的作用机制可能是通过改变激酶的活性降低了冷冻过程中蛋白质磷酸化修饰的改变,从而降低了精子的冷冻损伤。
张伟伟[5]（2020）在《SLO家族在中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子发生过程中的表达及功能》文中研究说明精子是在睾丸曲细精管内完成,属于非常复杂的细胞分裂分化过程,为了使这一过程有条不紊的完成,需要曲细精管的内外信号、膜蛋白等对这一发生过程进行严格有序的调控。目前认为精子形成可能与生殖细胞电位的改变密切相关。精子为了获得受精能力需要完成以下几个步骤:附睾成熟、精子获能、超活化、趋向性,最后是精子的顶体反应。这些生理过程与细胞内外离子浓度变化有关。离子通道在精子形成过程中可以调节其内外的渗透压平衡,可以通过改变膜电位的变化推进精子的各种生理过程;受精过程中,精子外部环境会有很大的改变,离子通道就起了至关重要的作用,因此离子通道蛋白的表达、以及其功能的改变都会影响有性生殖物种雄性配子的发育以及受精能力。中华绒螯蟹（学名:Eriocheir sinensis）的生活史比较复杂,其受精过程有别于其它物种,其个体的生活环境与其它物种也有很大的不同。中华绒螯蟹有一个非常重要的生理现象,即生殖洄游。淡水的离子浓度与海水的离子浓度有很大的不同,因此中华绒螯蟹在生殖迁移过程中经历了很强的离子浓度的变化。由此可见,离子浓度变化对中华绒螯蟹生殖发育起着不可或缺的作用。钾通道为目前为止种类和亚型最多的离子通道。有报道称钾离子通道对精子的形成过程以及受精过程都有调节作用,SLO家族是钾通道一类非常特殊的通道,这类通道不仅具有电压依赖性,还对其它因素如Ca2+、Na+、Cl-、pH等具有敏感性。本文以中华绒螯蟹生精细胞为实验材料,采用Western blot、免疫组化、免疫荧光、PCR、基因克隆等技术对SLO家族蛋白进行组织及细胞定位和序列分析;用全细胞膜片钳技术分析生精细胞SLO通道的电生理特性和表达情况。结果如下:1、通过Western blot确定了SLO1存在于中华绒螯蟹精巢以及其它组织内,但是储精囊内的精子SLO1表达较少。SLO2在精巢的生精细胞和储精囊内的精子均有表达,但表达出现了差异性。2、对编码SLO1蛋白的基因克隆,并将测序的结果进行分析,发现slo1 cDNA序列与其它物种有相似性较高,说明其保守性较强,且与拟穴青蟹的slo1最相近;克隆slo2.2的cDNA序列与其它物种虽有相似性,但是其保守性不是很高,与小鼠和和人类有很大的差异性,且与北黄道蟹（Cancer borealis）的slo2.2最相近,关系最为密切。（3）采用全细胞膜片钳技术记录SLO1介导的钙激活钾通道和SLO2介导的钠激活钾通道:结果表明中华绒螯蟹生精细胞的钾电流包含钙激活钾电流。随后加入不同的阻断剂IbTX、CdCl2观察该电流,发现这些阻断剂均可以将钾电流进行阻断,根据阻断的结果分析SLO1蛋白主要表达于精原细胞和精母细胞,这与前期的SLO1蛋白的免疫定位结果一致;SLO2介导的钠激活钾通道也存在于中华绒螯蟹的生精细胞内,但是生精细胞对钠离子的依赖性不同,精子对钠离子的依赖性较强,而精原细胞、精母细胞、精细胞对钠离子的依赖性较弱,说明SLO2在生精细胞的表达存在差异性。（4）观察SLO家族通道对精子的顶体反应的影响,发现钾通道不仅与精子的形成有关,而且还间接调节精子的顶体反应,SLO1与顶体反应相关,其不同抑制剂对顶体反应有不同的抑制作用;采用含不同浓度的钠离子作用于中华绒螯蟹的精子观察其顶体反应,发现钠离子和顶体反应没有直接的关系,这也间接说明SLO2的作用可能更多在精子能动性以及获能上面。综上所述,中华绒螯蟹生精细胞内既有SLO1介导的钙激活钾电流,也有SLO2介导的钠激活钾电流。前者随着精子的形成分布越来越少;后者表现出精子对钠离子的敏感性与其它生精细胞不同,需要更高钠离子浓度才能激活,这与中华绒螯蟹生殖洄游环境密切相关。通过顶体反应诱导率实验发现,SLO1不仅与精子的形成有关,而且还间接调节精子的顶体反应,SLO1通道的关闭导致顶体反应的降低。SLO2的作用可能更多在精子能动性以及获能上面,需进一步试验进行验证。
丁宁[6]（2020）在《肠道菌群失衡诱发雄性小鼠生精障碍的研究》文中研究指明研究背景:随着生活质量的提高,人类西方化的饮食结构中脂肪类摄入比例已高达40%,大量临床研究发现,高脂饮食在引发肥胖和脂代谢紊乱的同时,对男性精子质量也会造成影响,主要表现为精子数量及活力下降、染色体受损以及精子形态异常。有研究表明高脂饮食会改变人体内肠道微生物的组成,进而打破肠道微生物的生态平衡。肠道微生物在宿主的营养吸收、肠道与免疫系统的功能、脂肪代谢、能量供应等诸多重要生理过程中发挥作用。肠道菌群组成的变化与肥胖、代谢综合征、癌症、神经系统退行性疾病的等的发生、发展和治疗密切相关。然而,肠道菌群组成的变化是否会影响精子质量尚不明确。因此,我们应用C57BL/6雄鼠模型以及临床不育男性的样品进行了以下研究:研究目的:研究高脂饮食诱导的肠道菌群失衡对雄性小鼠精子质量影响及相关机制。研究方法:1.动物研究:（1）肠道菌群失衡供体雄鼠模型的构建:在实验的全过程中,分别给予供体雄鼠正常饮食（Normal Diet,ND）和高脂饮食（High-fat Diet,HFD）,构建ND、HFD肠道菌群供体模型;（2）肠道菌群受体雄鼠模型的构建:通过肠道菌群替代实验（Fecal microbiota transplantation,FMT）,将 ND、HFD 肠道菌群供体雄鼠的肠道微生物分别转移到正常饮食的受体雄鼠胃肠道内,建立正常菌群受体（ND-FMT）和高脂菌群受体（HFD-FMT）模型鼠。肠道菌群替代实验每隔一天进行一次,持续15周至造模结束;（3）对肠道菌群供体组雄鼠进行精子活力和数量的检测,并提取盲肠粪便DNA进行16S-rDNA测序,检测肠道菌群组成的变化;（4）对肠道菌群受体组雄鼠生殖状态进行实验分析:通过精子动力分析仪检测雄鼠精子数量和活力的变化;使用Elisa试剂盒检测血清中雄性激素和内毒素的水平;利用病理组织染色研究方法观察雄鼠睾丸组织的形态学变化;对睾丸组织进行转录组测序,研究肠道菌群失衡对宿主的睾丸组织中基因表达水平变化的影响;利用实时荧光定量PCR技术（Real-Time PCR,RT-PCR）对附睾组织的炎症情况进行检测;（5）检测ND-FMT和HFD-FMT组小肠组织的健康状况:利用病理组织染色、免疫组织化学和免疫荧光化学的方法检测小肠中的炎症情况和相关蛋白的表达变化;（6）提取盲肠粪便DNA进行16S-rDNA测序,对肠道菌群组成及功能的变化进行研究;（7）利用液质联用色谱仪分析检测粪便和血清中代谢产物的变化。2.临床研究:（1）收集健康男性及少精子症、弱精子症、畸型精子症男性的精液,对其精子质量及精液中内毒素的水平进行检测;（2）收集健康男性及少精子症、弱精子症、畸型精子症男性的血浆,对血浆中内毒素的水平进行检测;（3）收集健康男性及少精子症、弱精子症、畸型精子症男性的粪便样本,提取粪便中微生物的DNA进行16s-rDNA测序,对样本内的肠道微生物结构和组成进行检测。研究结果:（1）肠道菌群供体组中,与ND相比,食用高脂饮食的HFD雄鼠的精子活力显着下降,精子数量减少,肠道微生物的结构和组成发生显着变化;（2）肠道菌群受体组中,与ND-FMT组小鼠相比,接受HFD小鼠肠道微生物移植的HFD-FMT组雄鼠的精子活力、精子数量显着下降,血液中内毒素水平、卵泡刺激素水平上升。病理组织染色结果和RT-PCR相对定量检测结果显示HFD-FMT组小鼠睾丸组织生精细胞（圆形精子、长形精子、精母细胞）减少。睾丸转录组测序结果显示,与ND-FMT组相比,在HFD-FMT组中有583个基因表达下调2倍以上,133个基因表达上调2倍以上;与ND-FMT组相比,HFD-FMT组附睾组织中炎症因子,如单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemotactic protein 1,Mcp1）、白介素 1b（Interleukin 1b,Il1b）、趋化因子 10（C-X-C motifchemokine 10,Cxcl10）水平显着升高;（3）小鼠16S-rDNA的测序结果显示,ND-FMT和HFD-FMT两组小鼠的肠道菌群中拟杆菌属（Bacteroides）、普雷沃菌属（Prevotella）、Rikenella菌属、乳酸菌属（Lactobacillus）、AF12菌属的丰富度存在显着差异;（4）与ND-FMT组小鼠相比,接受NFD小鼠肠道微生物移植的HFD-FMT组雄鼠的小肠内有淋巴细胞和巨噬细胞的浸润,伴随Toll样受体4（Toll-like receptor 4,Tlr4）、髓样分化因子 88（Myeloid differentiation primary response 88,Myd88）表达水平升高;（5）与ND-FMT组相比,在HFD-FMT组粪便中组胺、皮质酮、左炔诺孕酮含量上升,血清中亚精胺含量下降;（6）在临床样本中,拟杆菌属（Bacteroides）和普雷沃氏菌属（Prevotella）的总丰度与精子活力显着负相关,血液中内毒素水平与拟杆菌属（Bacreroides）的丰度显着正相关;（7）在临床样本中,当Prevotella Copri（P.copri）含量低于3%时不会对精子质量产生影响,而当其在体内含量异常增多（>15%）时与精子活力呈显着负相关。研究结论:高脂饮食诱导的肠道菌群失衡会通过引发肠道炎症、内毒素血症和附睾炎症导致小鼠精子质量下降。为未来通过重建肠道菌群平衡以干预临床少弱畸精症的病人提供了一定的理论基础。
朱振东[7]（2020）在《猪精子能量代谢的调控机理研究》文中指出随着养猪业的规模化、专业化、集约化管理程度增加,人工授精技术的推广应用越来越广泛。猪人工授精技术对于提高生猪生产、促进优良种公猪利用率及加快遗传育种改良进程具有重要意义。猪人工授精技术使用的精液为15～17oC条件下保存的液态稀释精液。液态稀释精液的保存效果是制约猪人工授精技术发展的重要因素之一。精子运动的维持依赖于自身的能量供应。糖酵解和氧化磷酸化途径是体细胞广泛存在的重要能量代谢途径。细胞对能量代谢途径的选择取决于其微环境的能量代谢底物类型。精子在精浆和子宫液中做直线运动及在输卵管液中做超活化运动,即精子的代谢参与精子运动的调控。但是精子代谢对精子运动的调节作用及机制尚不清楚。通过探究精子代谢而改良稀释液成份对建立高效的猪精液保存稀释液配方具有重要意义。因此,本研究从精子代谢入手,探究精子氧化磷酸化途径及其相关作用因子在维持精子直线运动中的调控机制。本研究首先利用低糖模型探究糖酵解和氧化磷酸化供能方式对精子运动的影响,并检测精子运动轨迹变化及线粒体的转录翻译。其次,通过低糖稀释液模型及精子线粒体功能分析探究氧化磷酸化副产物活性氧（reactive oxygen species,ROS）对精子运动的损伤机制。此外,通过检测精子的谷胱甘肽合成及磷酸戊糖途径探究精子自身如何维持精子线粒体氧化磷酸化的运转。本研究主要取得如下结果:（1）精子在高糖液稀释液中做圆圈运动或类圆圈运动;降低稀释液中的葡萄糖含量促进猪精子直线运动。低糖稀释液通过激活精子线粒体活性、进而促进线粒体合成ATP（adenosine triphosphate）。精子直线运动的能量来源主要依靠线粒体合成的ATP。（2）猪精子在低糖稀释液的体外孵育过程中,精子存在线粒体基因的转录与翻译。线粒体翻译抑制剂处理结果揭示精子线粒体的转录与翻译参与了精子运动的调控。精子线粒体转录翻译主要通过影响线粒体功能,进而影响线粒体ATP的合成而调控精子的运动。（3）低糖稀释液在促进精子线粒体氧化磷酸化供能的同时也产生大量的副产物ROS,过量的ROS会氧化损伤精子的功能、降低精子的直线运动能力。（4）ROS主要氧化损伤精子线粒体蛋白转录系统及线粒体ATP合成系统。研究发现,随着胞内ROS含量的增加,精子线粒体呼吸链蛋白MT-ND1（NADPH dehydrogenase subunits 1）、MT-ND6（NADPH dehydrogenase subunits 6）和线粒体转录因子POLRMT（mitochondrial RNA polymerase）、TFAM（mitochondrial transcription factor-A）的4-HNE（4-hydroxynonenal）修饰增加,即MT-ND1、MT-ND6、POLRMT和TFAM的氧化损伤增加。并且,精子线粒体DNA也受到ROS的攻击而被氧化损伤。（5）在低糖稀释液中外源添加线粒体靶向抗氧化剂PQQ（pyrroloquinoline quinone）和Co Q10（coenzyme Q10）可以维持精子的直线运动,但是当线粒体翻译被抑制的情况下,添加这两种抗氧化剂均不能挽救精子的运动,说明PQQ和Co Q10不能有效减缓ROS对呼吸链上的蛋白MT-ND1和MT-ND6的氧化损伤。这主要是由于呼吸链上的蛋白更近于ROS产生的位点。PQQ和Co Q10主要通过保护线粒体的转录系统（POLRMT和TFAM）而维持线粒体的转录与翻译,进而为呼吸链上的来源于线粒体转录翻译蛋白（如MT-ND1和MT-ND6等）的周转提供新蛋白,维持线粒体ATP的合成,提高精子的直线运动。（6）猪精浆中存在合成谷胱甘肽（glutathione,GSH）的氨基酸底物,其中蛋氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸含量较高,半胱氨酸含量较低。在低糖稀释液中添加蛋氨酸、甘氨酸、谷氨酸及丝氨酸可以促进精子合成GSH,并缓解精子的氧化损伤而维持精子的直线运动。猪精子存在利用蛋氨酸合成GSH的途径,精子存在由蛋氨酸合成GSH途径所涉及的蛋白酶CBS（cystathionine beta synthase）、CTH（cystathionase）、GCLC（glutamate-cysteine ligase）和GSS（glutathione synthetase）;并且蛋白酶CBS和CTH含量随着精子氧化应激程度的增加而增加,GCLC和GSS蛋白酶含量则未发生显着变化。说明氧化应激可以诱导精子合成CBS和CTH蛋白酶,进而利用蛋氨酸合成GSH而减缓ROS诱导的氧化损伤。（7）氧化应激激活精子的ERK1/2-e IF4E-RSK信号通路。随着精子胞内ROS含量的增加,精子内的p-ERK1/2、p-RSK、p-e IF4E水平增加,这也揭示了精子可以通过自身氧化还原平衡系统减少ROS的氧化损伤。（8）精子的磷酸戊糖途径（pentose phosphate pathway,PPP）参与精子的直线运动调控。无糖稀释液不能持久维持精子的直线运动,而20%葡萄糖稀释液中则可以持久维持精子直线运动。低糖稀释液中的葡萄糖进入合成NADPH的PPP途径,未进入糖酵解供能途径。精子衣康酸修饰是调节其葡萄糖代谢重编程的关键因子。低糖稀释液可以促进三羧酸循环产生中间代谢产物衣康酸,衣康酸对精子糖酵解途径的ALDOA（aldolase A）酶进行修饰,使其失活,进而降低精子的糖酵解途径,使葡萄糖进入PPP途径,参与NADPH的合成,进而参与自身氧化还原稳态的调控。综上所述,本研究探究了精子代谢对直线运动的调控作用。发现精子直线运动主要受线粒体氧化磷酸化供能调控;氧化磷酸化副产物ROS主要氧化损伤精子线粒体转录翻译系统和能量合成系统;精子自身通过调节谷胱甘肽合成和磷酸戊糖途径而调节其胞内氧化还原平衡稳态,进而维持精子的高速直线运动。本研究发现为高效猪精液保存稀释液的研发提供理论依据,并为高效猪人工授精技术体系的建立奠定基础。
宋望成[8]（2020）在《犬精液低温保存及人工授精技术研究与应用》文中研究说明我国社会已呈现老龄化,独生子女家庭工作压力等客观因素的突出,饲养宠物成为众多家庭的消遣方式。近年来,宠物产业逐渐发展起来,尤其是宠物犬的数量明显高于其他宠物。随着市场对优秀种犬的需求增加,犬的人工辅助繁殖技术越来越受到关注,其中犬精液保存技术与人工输精技术对推动宠物犬产业发展具有十分重要的作用。为了充分利用优秀种犬的利用率,满足社会对宠物犬的需求,利用理想的精液稀释液进行低温保存,最终采用人工输精批量获得优秀宠物犬的后代是目前急需解决的问题。目前常用的稀释液中绝大多数都是添加卵黄作为保护剂。然而,很多研究报道卵黄具有携带病原微生物的风险,其成分复杂,甚至某些成分会与精子中的酶作用产生过氧化物,因此,采用其他物质代替卵黄作为保护剂是非常有必要的。本研究在犬精液稀释液中添加不同浓度的大豆卵磷脂进行低温保存,通过精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工输精后受胎率分析保存效果。同时,检测母犬整个发情期的血清孕酮水平,总结发情期孕酮变化规律,并再进行犬人工输精试验,评估不同浓度血清孕酮值时的人工输精后的受胎率。优化了犬精液低温保存剂,改进了犬人工输精技术,为推广犬辅助生殖技术奠定了基础。本研究主要获得以下结果:1.采用不同浓度（0.5%、1.0%、2.0%）的大豆卵磷脂作为保护剂,对法国斗牛犬精液进行低温4℃冷藏168 h,结果发现1.0%大豆卵磷脂组精子活率、活力、质膜完整率和顶体完整率均显着高于其他两个试验组和20%卵黄对照组,表明精液稀释液中添加1.0%大豆卵磷脂可以替代卵黄作为犬的精液低温冷藏保护剂。2.通过酶联荧光测定法对57只自然发情的法国斗牛母犬进行了血清孕酮值检测,结果发现从发情第0 d到第5 d孕酮水平呈缓慢增长趋势,在第5 d血清孕酮值为3.31±0.90 ng/m L,随后迅速上升;在第6 d孕酮值达到6.58±1.44 ng/m L,在发情第12d,血清孕酮水平为23.89±2.93 ng/m L,因此,发情期犬血清孕酮水平一直上升。3.在法国斗牛犬发情期不同血清孕酮值范围进行人工输精,结果发现血清孕酮值为20.01～25.00 ng/m L时人工输精,受孕率为63.1%,平均窝产仔数5.5只;血清孕酮值为15.01～20.00 ng/m L时人工输精,受孕率为47.3%,平均窝产仔数4.7只;血清孕酮值为10.00～15.00 ng/m L时人工输精,受孕率为36.8%,平均窝产仔数3.7只。结果表明血清孕酮值浓度为20.01～25.00 ng/m L时人工输精效果最佳。4.分别用含1.0%大豆卵磷脂和20.0%卵黄的稀释液冷藏精子,48 h后,对自然发情的血清孕酮值为20.01～25.00 ng/m L范围内的法国斗牛犬进行人工输精,共输精48只犬,结果发现1.0%大豆卵磷脂组母犬妊娠率为70.8%（17/24）,产仔总数为98只;20.0%卵黄组母犬妊娠率为62.5%（15/24）,产仔总数为80只,说明使用1.0%的大豆卵磷脂稀释液比20%卵黄稀释液低温保存犬的精子,用于人工输精效果更佳。因此,对于法国斗牛犬精液低温4℃保存,使用1.0%大豆卵磷脂作为保护剂代替20%卵黄是可行的;在人工输精时,当血清孕酮水平处于20.01～25.00 ng/m L时,人工输精效果显着好于其他血清孕酮值时的输精效果。
邵帅[9]（2019）在《氯氰菊酯对雄性大鼠青春期生殖发育和肠道菌群的影响》文中进行了进一步梳理拟除虫菊酯类农药作为一种环境内分泌干扰物,可以通过干扰性激素受体的结合的方式,抑制或刺激性激素的正常合成、释放和转运过程,影响内分泌系统正常运行,引起免疫系统、生殖系统等异常。随着拟除虫菊酯类农药的产量、使用量和环境残留量的不断增加,它们的生态健康风险也越来越引起了人们的广泛关注。近年来的研究表明,肠道菌群作为人体内的“超级器官”,与人体的各种健康问题密切相关,受遗传基因、食物、外源化合物等的共同作用而改变,并参与人类各项生理生化和代谢活动。因此研究肠道菌群和代谢之间的相互作用机制和宿主健康之间的关联,在调节外源化合物的健康风险方面具有重要的意义?由于处于生物体青春期前期的个体发育尚不成熟,雌激素样农药可能对发育中的内分泌和生殖器官产生持久不可逆的损伤或障碍,而从配子发生的角度来看,雄性更容易受到雌激素样化合物的影响。因此,对于雌激素样化合物在处于青春期这一敏感期的雄性个体中的影响和作用研究尤为重要。我们认为在研究雌激素样农药对雄性生殖发育及代谢的影响时,肠道菌群的作用也不可忽视。已有研究发现拟除虫菊酯如氯氰菊酯具有内分泌干扰效应,通过腹腔注射氯氰菊酯暴露青春期雄鼠后,出现了青春期启动日龄明显提前、血清FSH、LH、性激素水平增高、GnRH脉冲释放间隔缩短的现象,但其中的机制并不清楚。而且由于农药的典型暴露途径为经口暴露而非腹腔注射,氯氰菊酯等农药在经过消化道进入生物体后,将发生一系列的复杂代谢反应,尤其与肠道微生物之间的相互作用后导致的可能健康风险尚需要进一步研究。所以本研究以50,200和500μg/kg的氯氰菊酯（cypermethrin,CYP）采用口服方式暴露出生23天（PND 23）的雄性SD大鼠,通过检测血常规,精子以及采用微生物分子生态学方法分析肠道菌群的结构和功能改变,整合分析阐明具有内分泌干扰效应的氯氰菊酯经口暴露后,青春期雄鼠肠道菌群及代谢扰动探讨对雄鼠青春期生殖发育的影响及其可能机制。主要工作及结果如下:（1）500μg/kg氯氰菊酯暴露后,血常规的结果显示雄鼠红细胞分布宽度RDW显着增加。通过采用16S rRNA的高通量测序技术对暴露后青春期雄鼠肠道菌群进行分析。结果显示,500μg/kg氯氰菊酯雄鼠的肠道菌群发生了明显变化。在科的水平上,拟杆菌科（Bacteroidaceae）,韦荣球菌科（Veillonellaceae）和Tannerellaceae的相对丰度明显上升;在属水平上,Prevotellaceae UCG-003相对丰度上升。这些肠道菌群的结构变化指示雄鼠的免疫平衡可能受到损害。而且由于RDW也与炎症相关,我们推测氯氰菊酯的暴露可能扰动了青春期雄鼠的免疫平衡。（2）我们发现500μg/kg氯氰菊酯暴露后雄鼠体重增长率降低,而肠道菌群中与体重相关的Prevotellaceae UCG-003丰度显着相关,这说明氯氰菊酯暴露后肠道菌群失衡,造成雄鼠代谢异常,从而影响青春期雄鼠体重增长。综上,我们通过研究氯氰菊酯对青春期大鼠血液指标、精子指标及肠道菌群的扰动效应,我们发现氯氰菊酯的摄入可能通过改变肠道菌群正常的组成和结构,增加机体内代谢紊乱,免疫反应等健康风险,提示肠道菌群在机体中的在重要作用,以及将肠道微生物纳入环境化合物健康风险评估的积极意义。我们的研究为今后研究拟除虫菊酯类农药的毒性效应提供了新的模式和思路,为开发低生态风险的农药提供了重要参考。
林经洋[10]（2019）在《保精固元汤加减治疗DFI异常男性不育症的临床观察》文中研究说明目的:通过观察保精固元汤加减对DFI异常男性不育症患者精子DNA完整性的影响,探讨精子DNA损伤与男性不育症之间的机理与治疗方法。方法:将符合纳入标准的25例DFI异常男性不育症患者,口服保精固元汤加减颗粒剂进行治疗,按3个月为1个疗程,一共进行3个月治疗。（1）在开始治疗前和治疗后分别对患者进行精液常规与DFI检测。（2）在治疗前后3个月对患者进行中医症状评分。（3）采用SPSS20.0软件处理数据,计量资料用均数±标准差(（3?±）表示。非正态分布者采用符号秩和检验,符合正态分布采用配对t检验。结果:服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,A级精子百分比平均值增加至22.61±16.64,A级精子百分比与治疗前均值比较,有显着性差异（P<0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,B级精子百分比平均值增加至11.98±8.17,B级精子百分比与治疗前均值比较,无显着性差异（P>0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,A+B+C级精子百分比平均值增加至45.52±28.78,A+B+C级精子百分比与治疗前均值比较,有显着性差异（P<0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,精液量平均值增加至3.42±1.30,精液量与治疗前均值比较,无显着性差异（P>0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,精子密度平均值降至41.37±28.54,精子密度与治疗前均值比较,无显着性差异（P>0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,精子总数平均值降至140.65±119.40,精子总数平均值与治疗前均值比较,无显着性差异（P>0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,正常精子形态率平均值增加至29.51±27.17,正常精子形态率平均值与治疗前均值比较,有显着性差异（P<0.05）。服用保精固元汤加减颗粒剂3个月后,DFI比平均值降至17.33±15.72,DFI平均值与治疗前均值比较,有显着性差异（P<0.05）。治疗前中医症状评分为10.64±6.47;治疗3个月后中医症状评分为5.32±7.17,治疗前后中医症状评分有显着性差异（P=0.000<0.05）。治愈4例,占16%;显效10例,占40%;有效3例,占12%;无效8例,占32%。治疗后西医疗效判定标准结果发现治愈4例,占16%;显效7例,占28%;有效4例,占16%;无效10例,占40%。结论:保精固元汤加减颗粒剂能够显着改善DFI异常男性不育症患者的A级精子百分比、A+B+C级精子百分比、正常精子形态率及精子DFI值并且能够明显改善患者临床症状。经3个月的治疗,保精固元汤加减颗粒剂未能明显改善B级精子百分比、精液量、精子密度、精子总数。本次前瞻性研究结果验证了保精固元汤加减颗粒剂对DFI异常男性不育症患者的有效性,并且因其临床的安全性高、价格低廉、依从性佳因此便于推广应用,而且也验证了导师“保精固元”的理论,为下一步临床对照研究打下基础。
二、Sensitivity of sperm motility assay for detecting endotoxin effect on human sperm in vitro（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Sensitivity of sperm motility assay for detecting endotoxin effect on human sperm in vitro（论文提纲范文）
（1）益肾活血饮改善肾虚血瘀证VC患者SDF及胚胎质量的随机对照研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 精索静脉曲张性精液异常及对胚胎影响的现代医学研究进展 |
| 一、流行病学及男性生育力评价指标进展 |
| 二、精索静脉曲张与精子DNA碎片相关性研究 |
| 三、精子DNA碎片对辅助生殖技术助孕结局的影响研究 |
| 四、精索静脉曲张性精子DNA碎片率异常的西医治疗 |
| 第二节 精索静脉曲张和不育症的中医研究现状 |
| 一、中医学对精索静脉曲张的认识和研究 |
| 二、中医学对不育症的认识和研究 |
| 三、中医学对精索静脉曲张性不育症的认识和研究 |
| 四、中医学对精索静脉曲张性精子异常的治疗现状 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 研究方案 |
| 一、研究背景和基础 |
| 二、研究目的 |
| 三、研究方法 |
| 四、治疗方法 |
| 五、观察指标及方法 |
| 六、研究过程质量控制 |
| 七、统计学处理 |
| 第二节 研究结果 |
| 一、一般资料和配偶获卵情况比较 |
| 二、三组治疗前各项基础指标比较 |
| 三、治疗前SDF与基线资料的相关性分析 |
| 四、三组精索静脉曲张严重程度构成比比较 |
| 五、三组治疗前后精液各参数的比较 |
| 六、三组治疗后各指标比较 |
| 七、不同干预措施对不同程度VC患者SDF的治疗效果比较 |
| 八、干预后SDF正常和异常患者胚胎质量比较 |
| 九、干预后三组IVF胚胎质量评估指标比较 |
| 十、中医证型转归 |
| 十一、安全性评价 |
| 第三节 讨论 |
| 一、本研究基础参数的均衡和干扰因素的排除 |
| 二、男性生育评估指标SDF对 IVF助孕结局的影响 |
| 三、三组干预措施改善精液常规参数和SDF不同疗效的分析 |
| 四、益肾活血饮有效性和安全性分析及资料支持 |
| 五、三组干预措施后IVF后期阶段胚胎质量存有差异 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）在稀释液中添加虾青素对鸡精液保存效果影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 综述 |
| 前言 |
| 1.1 鸡人工授精的发展现状 |
| 1.2 公鸡精液保存技术现状 |
| 1.2.1 公鸡精液低温保存技术现状 |
| 1.2.2 公鸡精液常温保存技术现状 |
| 1.2.3 影响公鸡精液保存的条件 |
| 1.3 公鸡精液保存稀释液成分 |
| 1.3.1 能量物质 |
| 1.3.2 缓冲物质 |
| 1.3.3 抗生素 |
| 1.4 抗氧化剂 |
| 1.4.1 抗氧化剂在精液稀释液中的应用 |
| 1.4.2 虾青素 |
| 1.5 鸡精子质量检测 |
| 1.5.1 鸡精子活力 |
| 1.5.2 鸡精液抗氧化性 |
| 1.5.3 鸡精子质膜完整性 |
| 1.5.4 鸡精子顶体完整性 |
| 1.5.5 鸡精子畸形率 |
| 1.5.6 鸡精子能量代谢 |
| 1.6 精子受精能力 |
| 1.7 研究目的及意义 |
| 第二章 在稀释液中添加虾青素对鸡精液低温保存效果的影响 |
| 前言 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 主要仪器及耗材 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试验设计 |
| 2.2.2 试验精液保存 |
| 2.2.3 精液测定指标 |
| 2.3 试验结果与分析 |
| 2.3.1 低温保存条件下稀释精液中精子活力分析 |
| 2.3.2 低温保存条件下稀释精液中精子顶体完整率分析 |
| 2.3.3 低温保存条件下稀释精液中精子质膜完整率分析 |
| 2.3.4 低温保存条件下稀释精液精子畸形率分析 |
| 2.3.5 低温保存条件下稀释精液能量代谢分析 |
| 2.3.6 低温保存条件下稀释精液抗氧化能力分析 |
| 2.3.7 低温保存条件下稀释精液受精率结果分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 虾青素对鸡精液常温保存效果的影响 |
| 前言 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 主要仪器及耗材 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 试验设计 |
| 3.2.2 精液保存 |
| 3.2.3 精液测量指标 |
| 3.3 试验结果与分析 |
| 3.3.1 常温保存条件下稀释精液中精子活力分析 |
| 3.3.2 常温保存条件下稀释精液中精子顶体完整率分析 |
| 3.3.3 常温保存条件下稀释精液中精子质膜完整率分析 |
| 3.3.4 常温保存条件下稀释精液精子畸形率分析 |
| 3.3.5 常温保存条件下稀释精液能量代谢分析 |
| 3.3.6 常温保存条件下稀释精液抗氧化能力分析 |
| 3.3.7 常温保存条件下稀释精液受精成功率检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 稀释液中添加虾青素与番茄红素对鸡精液保存效果的比较 |
| 前言 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 主要仪器及耗材 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 试验设计 |
| 4.2.2 精液测量指标 |
| 4.3 试验结果与分析 |
| 4.3.1 低温(4℃)保存条件下试验结果与分析 |
| 4.3.2 常温(25~30℃)保存条件下试验结果与分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论与创新点 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（3）蒙古马精液冷冻保存的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 马精液冷冻保存的研究进展 |
| 1.2 马精液冷冻保存中存在的问题 |
| 1.3 AI在国内外的使用状况 |
| 1.4 AI使用效率低下的原因 |
| 1.5 马精液冷冻保存损伤机制 |
| 1.5.1 机械损伤 |
| 1.5.2 氧化损伤 |
| 1.6 影响马精液冷冻保存质量的因素 |
| 1.6.1 外观 |
| 1.6.2 精液量 |
| 1.6.3 精液密度 |
| 1.6.4 精清 |
| 1.6.5 离心 |
| 1.6.6 渗透压 |
| 1.6.7 降温速率 |
| 1.6.8 平衡时间 |
| 1.6.9 解冻程序 |
| 1.7 马精液冷冻保存液的主要成分 |
| 1.7.1 冷冻保护剂 |
| 1.7.2 卵黄 |
| 1.7.3 糖类 |
| 1.7.4 抗氧化剂 |
| 1.8 马精液品质常用测定指标 |
| 1.8.1 精子活率 |
| 1.8.2 精子形态 |
| 1.8.3 顶体完整率 |
| 1.8.4 质膜完整率 |
| 1.8.5 线粒体膜电位 |
| 1.8.6 抗氧化能力 |
| 2 蒙古马细管精液冷冻程序的优化研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 2.1.4 试验设计 |
| 2.1.5 精子质量评价 |
| 2.1.6 数据统计与分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 渗透压对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.2 不同离心方法去除精清对蒙古马精液冷冻质量及精子损失率的影响 |
| 2.2.3 不同平衡时间对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.4 不同降温速率对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 渗透压对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3.2 不同离心方法去除精清对蒙古马精液冷冻质量及精子损失率的影响 |
| 2.3.3 不同平衡时间对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3.4 不同降温速率对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.4 结论 |
| 3 冷冻保护液不同成分对蒙古马细管精液冷冻效果的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物的选择 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 3.1.4 试验设计 |
| 3.1.5 精子质量评价 |
| 3.1.6 数据统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同浓度gly和DMF对马精子冷冻效果的影响 |
| 3.2.2 不同浓度卵黄、LDL对蒙古马精子低温保存及冷冻效果的影响 |
| 3.2.3 不同糖类组合对马精子低温保存效果的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 不同浓度gly和DMF对马精子冷冻效果的影响 |
| 3.3.2 不同浓度卵黄、LDL对蒙古马精子低温保存及冷冻效果的影响 |
| 3.3.3 不同糖类组合对马精子低温保存效果的影响 |
| 3.4 结论 |
| 4 不同抗氧化剂对蒙古马精液品质的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物的选择 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 4.1.4 试验设计 |
| 4.1.5 精子质量评价 |
| 4.1.6 统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同抗氧化剂对冷冻-解冻后马精子质量的影响 |
| 4.2.2 不同抗氧化剂对蒙古马精液中抗氧化相关指标的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 5 蒙古马细管精液冷冻保护液的验证 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物的选择 |
| 5.1.2 稀释液的制备 |
| 5.1.3 精液的采集 |
| 5.1.4 精液的处理 |
| 5.1.5 精液的冷冻及解冻 |
| 5.1.6 试验设计 |
| 5.1.7 母马的管理和人工授精 |
| 5.1.8 数据统计分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 冻后活力均值 |
| 5.2.2 受胎率验证 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 输精方法对受胎率的影响 |
| 5.3.2 不同种公马精液对受胎率的影响 |
| 5.3.3 不同精子活力对受胎率的影响 |
| 5.4 小结 |
| 6 结论 |
| 7 研究创新点 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 参考文献 |
（4）褪黑素对牛冷冻保存精子的蛋白质组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩写词表 |
| 一 文献综述 |
| 1 精液冷冻保存概况 |
| 2 精液冷冻研究历史发展 |
| 3 精液冷冻技术通用流程 |
| 4 冷冻对精子造成的损伤 |
| 4.1 精子冷冻机械损伤 |
| 4.2 精子形态结构损伤 |
| 4.3 精子生物大分子损伤 |
| 4.3.1 DNA与 RNA损伤 |
| 4.3.2 蛋白质损伤 |
| 5 目前常用的提高冻后精子品质的方法 |
| 5.1 冷冻保护剂的改进 |
| 5.2 添加抗氧化物质 |
| 5.3 优化冷冻与解冻速率 |
| 6 褪黑素的主要研究进展 |
| 7 精液的蛋白质组学研究进展 |
| 8 本研究目的与意义 |
| 二 牛精子蛋白质组学样品前处理方法 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 主要试剂及耗材 |
| 1.1.1 试剂 |
| 1.1.2 实验器材 |
| 1.2 试验试剂及配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的清洗 |
| 2.2 蛋白质的还原烷基化 |
| 2.3 FASP酶解反应 |
| 2.4 溶液内酶解反应 |
| 2.5 胶内酶解反应 |
| 2.6 数据的采集和分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 比较不同蛋白提取液对全蛋白质组鉴定的影响 |
| 3.2 比较不同酶解方式对精子全蛋白质组鉴定的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 三 褪黑素对牛冷冻保存精子的蛋白质组学研究 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 主要试剂及耗材 |
| 1.1.1 试剂 |
| 1.1.2 实验器材 |
| 1.2 试验试剂及配制 |
| 1.3 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 精液的采集和冷冻 |
| 2.1.1 准备假阴道 |
| 2.1.2 采精 |
| 2.1.3 精液冷冻 |
| 2.2 精子蛋白质提取 |
| 2.3 精子蛋白质还原烷基化 |
| 2.4 使用TMT肽段标记 |
| 2.5 磷酸化富集 |
| 2.6 数据的采集和分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 添加不同浓度褪黑素对解冻精子活力影响 |
| 3.2 冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后精子蛋白质组学研究 |
| 3.2.1 冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后蒙古牛精子蛋白质组学结果 |
| 3.2.2 冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后鲁西牛精子蛋白质组学结果 |
| 3.2.3 蒙古牛和鲁西牛冷冻前精子蛋白质组学结果 |
| 3.2.4 分子生物学验证结果 |
| 3.3 冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后精子磷酸化蛋白质组学研究 |
| 3.3.1 冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后蒙古牛精子磷酸化蛋白质组学结果 |
| 3.3.2 冷冻前、冷冻后、添加褪黑素冷冻后鲁西牛精子磷酸化蛋白质组学结果 |
| 3.3.3 褪黑素可能影响的磷酸化方式 |
| 3.3.4 磷酸化影响通路 |
| 4 讨论 |
| 4.1 线粒体引起的凋亡 |
| 4.2 精子运动与磷酸化 |
| 4.3 精子冷冻对肌动蛋白影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）SLO家族在中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子发生过程中的表达及功能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 精子的形成及受精过程 |
| 1.1.1 精子形成过程 |
| 1.1.2 精子的获能 |
| 1.1.3 精子的顶体反应 |
| 1.1.4 中华绒螯蟹精子的成熟过程 |
| 1.2 离子通道的研究进展 |
| 1.2.1 离子通道的功能及分类 |
| 1.2.2 钾离子通道的分类与特性 |
| 1.2.3 SLO家族钾离子通道 |
| 1.3 离子通道在生殖方面的研究进展 |
| 1.3.1 精子成熟和受精过程中离子通道的研究进展 |
| 1.3.2 离子通道与精子激活 |
| 1.3.3 离子通道与精子的趋化性 |
| 1.3.4 精子离子通道与顶体反应 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 第二章 SLO蛋白在中华绒螯蟹生殖系统的定位 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 仪器与试剂 |
| 2.3.1 仪器 |
| 2.3.2 试剂 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 免疫印迹 |
| 2.4.2 免疫组组织化学技术 |
| 2.4.3 免疫荧光技术 |
| 2.5 结果与分析 |
| 2.5.1 SLO1 蛋白在生精细胞内的定位 |
| 2.5.2 SLO2 蛋白在生精细胞的定位 |
| 2.6 讨论 |
| 第三章 中华绒螯蟹SLO基因的生物信息学分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 仪器和试剂 |
| 3.3.1 仪器 |
| 3.3.2 试剂 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 RNA提取 |
| 3.4.2 RT-PCR |
| 3.4.3 引物设计 |
| 3.4.4 PCR扩增 |
| 3.4.5 目的片段的连接、转化及测序 |
| 3.4.6 slo基因的生物信息学分析 |
| 3.5 结果与分析 |
| 3.5.1 中华绒螯蟹slo1 扩增结果 |
| 3.5.2 中华绒螯蟹slo1 基因测序结果 |
| 3.5.3 中华绒螯蟹slo2.2 基因测序 |
| 3.6 讨论 |
| 第四章 中华绒螯蟹生精细胞SLO家族钾电流的检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 仪器和试剂 |
| 4.3.1 仪器 |
| 4.3.2 试剂 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 生精细胞的提取 |
| 4.4.2 全细胞外向钾电流的记录 |
| 4.4.3 数据统计分析 |
| 4.5 结果与分析 |
| 4.5.1 不同物种生精细胞全细胞钾电流鉴定 |
| 4.5.2 SLO1 介导的外向钾电流的鉴定与特性分析 |
| 4.5.3 生精细胞BK电流的分布 |
| 4.5.4 SLO2.2 介导的外向钾电流的鉴定与特性分析 |
| 4.6 讨论 |
| 第五章 SLO家族钾通道对中华绒螯蟹精子顶体反应的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.3 仪器和试剂 |
| 5.3.1 仪器 |
| 5.3.2 试剂 |
| 5.4 实验方法 |
| 5.4.1 中华绒螯蟹精子获取 |
| 5.4.2 精子密度测定 |
| 5.4.3 精子成活率测定 |
| 5.4.4 顶体诱导率的分组设计 |
| 5.4.5 精子在不同试剂下的顶体反应 |
| 5.5 结果与分析 |
| 5.5.1 精子成活率的统计 |
| 5.5.2 不同实验组的顶体诱导率 |
| 5.5.3 各时期占总顶体诱导率的百分比 |
| 5.6 讨论 |
| 5.6.1 SLO家族通道对精子顶体反应的影响 |
| 第六章 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间取得的研究成果 |
（6）肠道菌群失衡诱发雄性小鼠生精障碍的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 国内外研究背景 |
| 1.1.1 肠道微生物简介 |
| 1.1.2 肠道微生物的功能 |
| 1.1.3 影响肠道微生物的因素 |
| 1.1.4 肠道菌群与疾病的研究 |
| 1.1.5 肠道菌群与生殖系统相关功能和疾病的研究 |
| 1.2 主要研究内容 |
| 1.3 主要研究方法及技术路线 |
| 1.4 理论与实践意义 |
| 1.5 课题来源 |
| 第二章 高脂饮食诱导的肠道菌群失衡对精子质量的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 抗生素预处理对雄鼠的影响 |
| 2.3.2 肠道菌群供体雄模型鼠的成功构建 |
| 2.3.3 高脂饮食诱导的肠道菌群失衡对受体雄鼠精子质量及体内激素和糖脂代谢的影响 |
| 2.3.4 肠道菌群移植后受体雄鼠肠道菌群组成及功能的变化 |
| 2.3.5 高脂饮食诱导的肠道菌群诱发受体鼠的慢性炎症 |
| 2.3.6 高脂饮食诱导的肠道菌群失衡对受体雄鼠睾丸组织形态及基因表达水平的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 肠道菌群失衡对精子质量影响的临床研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3. 结果 |
| 3.3.1 临床样本中健康人与少、弱、畸精症患者间肠道微生物组成的差异 |
| 3.3.2 临床样本中精子质量与肠道微生物的相关性分析 |
| 3.3.3 临床样本中肠道微生物与内毒素水平的关系 |
| 3.3.4 临床样本中精子质量与内毒素水平的关系 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）猪精子能量代谢的调控机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 猪精子保存研究进展 |
| 1.1 猪人工授精技术的研究进展 |
| 1.2 猪精液和精子 |
| 1.2.1 猪精囊腺、前列腺及尿道球腺的生理特点 |
| 1.2.2 精子发生 |
| 1.2.3 公猪精液的特点 |
| 1.2.4 猪精子的生理结构特点 |
| 1.2.5 猪精浆成份特点 |
| 1.3 精子在雌性生殖道内的迁移 |
| 1.3.1 子宫颈、子宫与精子的互作 |
| 1.3.2 输卵管与精子的互作 |
| 1.4 猪精液保存的主要方式 |
| 1.4.1 常温保存 |
| 1.4.2 冷冻保存 |
| 1.5 常温保存稀释液 |
| 1.5.1 猪精液常温稀释液种类介绍 |
| 1.5.2 稀释液的营养成份 |
| 1.5.3 稀释液的pH |
| 1.5.4 稀释液的渗透压 |
| 1.5.5 稀释液抗生素的使用 |
| 1.6 精子质量检测方法 |
| 1.6.1 精子运动指标分析 |
| 1.6.2 质膜完整 |
| 1.6.3 顶体完整 |
| 1.6.4 线粒体活性 |
| 1.6.5 精子的脂质过氧化检测 |
| 第二章 精子能量代谢研究进展 |
| 2.1 精子糖酵解途径研究 |
| 2.1.1 糖酵解供能 |
| 2.1.2 糖酵解与精子功能的关系 |
| 2.2 精子线粒体氧化磷酸化 |
| 2.2.1 精子线粒体的特征及功能 |
| 2.2.2 精子线粒体氧化磷酸化供能途径 |
| 2.2.3 精子线粒体呼吸链复合物 |
| 2.3 精子糖酵解与氧化磷酸化代谢途径的关系 |
| 第三章 精子ROS氧化损伤研究进展 |
| 3.1 ROS的种类 |
| 3.2 ROS的来源 |
| 3.2.1 精液ROS的内源来源 |
| 3.2.2 精液ROS的外源来源 |
| 3.3 精子ROS的产生 |
| 3.4 ROS对精子的影响 |
| 3.4.1 ROS有利于促进精子功能 |
| 3.4.2 ROS对精子的不利影响 |
| 3.5 抗氧化剂的应用 |
| 3.5.1 酶类抗氧化剂 |
| 3.5.2 非酶类抗氧化剂 |
| 3.5.3 胺类激素物质 |
| 3.6 研究目的与意义 |
| 试验部分 |
| 第四章 线粒体氧化磷酸化对猪精子运动方式的调节 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 主要仪器设备 |
| 4.1.2 主要材料和试剂 |
| 4.2 试验步骤 |
| 4.2.1 试验动物及其饲养 |
| 4.2.2 猪精液采集 |
| 4.2.3 猪精液稀释处理 |
| 4.2.4 猪精液孵育处理 |
| 4.2.5 猪精子运动分析 |
| 4.2.6 猪精子质膜完整指标检测 |
| 4.2.7 流式细胞分析猪精子线粒体活性 |
| 4.2.8 线粒体基因在猪精子上的表达分析 |
| 4.2.9 猪精子ATP含量分析 |
| 4.2.10 猪精子线粒体蛋白的免疫荧光分析 |
| 4.2.11 Western Blotting检测猪精子线粒体蛋白在孵育过程的表达变化 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 利用不同梯度浓度葡萄糖的Modena液孵育精子而探究精子直线运动与葡萄糖含量的关系 |
| 4.3.2 线粒体呼吸链复合物I抑制剂鱼藤酮降低精子的直线运动、线粒体活性及ATP含量 |
| 4.3.3 猪精子线粒体基因转录与翻译 |
| 4.3.4 线粒体翻译抑制剂CRP呈浓度依赖性抑制线粒体翻译而降低精子的直线运动 |
| 4.3.5 线粒体翻译抑制剂CRP呈时间依赖性抑制线粒体翻译而降低精子的直线运动 |
| 4.3.6 细胞质翻译抑制剂(CHX)和核转录抑制剂(AMNT)不影响猪精子的直线运动方式 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 低糖稀释产生的ROS对猪精子的损伤机理研究 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 仪器 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 相关抗体 |
| 5.1.4 相关试剂配制 |
| 5.2 试验步骤 |
| 5.2.1 试验动物及其饲养 |
| 5.2.2 猪精液采集 |
| 5.2.3 猪精液稀释处理 |
| 5.2.4 猪精液孵育处理 |
| 5.2.5 猪精子运动指标检测 |
| 5.2.6 流式细胞术分析猪精子线粒体活性 |
| 5.2.7 DNA分离和长链PCR扩增 |
| 5.2.9 猪精子ATP含量分析 |
| 5.2.10 猪精子线粒体ROS含量分析 |
| 5.2.11 猪精子线粒体蛋白的免疫荧光分析 |
| 5.2.12 Western Blotting检测猪精子蛋白在孵育过程的表达变化 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 低糖稀释液稀释后在孵育过程中精子的运动形式 |
| 5.3.2 低糖应激对精子损伤的机理 |
| 5.3.3 PQQ和 Co Q10 处理降低精子ROS含量,减少线粒体蛋白损伤,并增加线粒体膜电位、ATP含量和精子直线运动 |
| 5.3.4 在线粒体翻译抑制剂D-氯霉素(CRP)处理下,PQQ和 Co Q10 不能增加线粒体蛋白含量及精子直线运动 |
| 5.3.5 在低糖稀释液中添加PQQ或 Co Q10 会增强精子的线粒体基因转录与翻译 |
| 5.3.6 细胞质翻译抑制剂(CHX)和核转录抑制剂(AMNT)不影响精子的TFAM和POLRMT水平 |
| 5.4 .讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 精子谷胱甘肽合成系统调控精子运动 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 主要仪器设备 |
| 6.1.2 主要材料和试剂 |
| 6.2 试验步骤 |
| 6.2.1 试验动物及其饲养 |
| 6.2.2 猪精液采集 |
| 6.2.3 猪精液稀释处理 |
| 6.2.4 猪精液孵育处理 |
| 6.2.5 精浆氨基酸的分析 |
| 6.2.6 猪精子运动指标检测 |
| 6.2.7 流式细胞分析猪精子线粒体活性 |
| 6.2.8 精子总谷胱甘肽含量 |
| 6.2.9 精子ROS检测 |
| 6.2.10 猪精子CBS、CTH、GCLC、GSS基因的表达分析 |
| 6.2.11 猪精子ATP含量分析 |
| 6.2.12 Western Blotting检测 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 猪精浆中的GSH合成底物(氨基酸)与精液品质关系 |
| 6.3.2 在低糖稀释液中添加蛋氨酸会促进猪精子的直线运动 |
| 6.3.3 抑制谷胱甘肽的合成会降低精子的直线运动 |
| 6.3.4 低糖稀释液激活精子翻译合成CBS和 CTH限制酶而利用Met合成GSH |
| 6.3.5 氧化应激诱导精子利用蛋氨酸合成GSH相关蛋白酶的合成 |
| 6.3.6 氧化应激激活精子的ERK1/2/ e IF4E/RSK信号通路,合成相关蛋白酶,从而利用蛋氨酸合成GSH而缓解ROS对精子氧化损伤 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 磷酸戊糖途径参与猪精子运动的调控 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 主要仪器设备 |
| 7.1.2 主要材料和试剂 |
| 7.2 试验步骤 |
| 7.2.1 试验动物及其饲养 |
| 7.2.2 猪精液采集 |
| 7.2.3 猪精液稀释处理 |
| 7.2.4 猪精液孵育处理 |
| 7.2.5 猪精子运动指标检测 |
| 7.2.6 流式细胞分析猪精子线粒体活性 |
| 7.2.7 精子还原型总谷胱甘肽与氧化谷胱甘肽的比值检测 |
| 7.2.8 精子总NADPH含量及NADPH/NADP+的比值检测 |
| 7.2.9 精子ALDOA活性检测 |
| 7.2.10 精子G6PD活性检测 |
| 7.2.11 精子总衣康酸修饰检测 |
| 7.2.12 GS/MS检测精子和精液中的衣康酸 |
| 7.2.13 精子ROS检测 |
| 7.2.14 猪精子质膜完整指标检测 |
| 7.2.15 猪精子ATP含量分析 |
| 7.2.16 Western Blotting |
| 7.3 结果与分析 |
| 7.3.1 葡萄糖对精子运动的影响 |
| 7.3.2 猪精子存在NADPH的磷酸戊糖途径合成系统 |
| 7.3.3 G6PD活性抑制剂(6-AN)抑制精子磷酸戊糖途径,调节精子直线运动 |
| 7.3.4 精子衣康酸修饰抑制糖酵解途径,促进磷酸戊糖途径 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新点 |
| 后续研究工作 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）犬精液低温保存及人工授精技术研究与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 前言 |
| 1.1 犬精液低温保存研究进展 |
| 1.2 犬人工输精技术的发展 |
| 1.3 本试验的目的与意义 |
| 第二章 大豆卵磷脂替代卵黄低温保存犬精液的研究 |
| 引言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 母犬最佳人工输精时间的确定 |
| 引言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 大豆卵磷脂替代卵黄冷藏精子后的繁殖效果 |
| 引言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论与创新点 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究内容 |
| 参考文献 |
| 附录 犬精子质量参数 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）氯氰菊酯对雄性大鼠青春期生殖发育和肠道菌群的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 拟除虫菊酯类农药的毒理学研究进展 |
| 1.1.1 拟除虫菊酯类农药概述 |
| 1.1.2 拟除虫菊酯类农药毒理学研究进展 |
| 1.1.3 拟除虫菊酯类农药的人体暴露情况 |
| 1.2 肠道菌群的研究现状 |
| 1.2.1 肠道菌群简介 |
| 1.2.2 肠道菌群对环境污染物的作用 |
| 1.2.3 环境污染物对肠道菌群的影响 |
| 1.2.4 基于16S rRNA基因高通量测序研究肠道菌群 |
| 1.3 本论文研究目的和意义 |
| 1.3.1 研究目的和意义 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 第二章 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器及设备 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 动物分组及样品采集 |
| 2.2.1 动物分组及给药 |
| 2.2.2 样品采集 |
| 2.3 血常规指标分析 |
| 2.4 精子数及精子活力分析 |
| 2.4.1 精子计数 |
| 2.4.2 精子活力检测 |
| 2.5 微生物群落多样性测序 |
| 2.5.1 粪便DNA提取及PCR扩增 |
| 2.5.2 磁珠纯化 |
| 2.5.3 上机测序 |
| 2.5.4 机测序数据处理统计 |
| 2.5.5 OTU聚类 |
| 2.5.6 OTU物种注释及统计 |
| 2.6 α-多样性分析(α-Diversity Analysis) |
| 2.6.1 多样性指数分析 |
| 2.6.2 稀释曲线(Rarefaction curve) |
| 2.7 物种组成分析 |
| 2.7.1 优势物种相对丰度图 |
| 2.7.2 OTU分布Venn图 |
| 2.8 β-多样性分析(β-Diversity Analysis) |
| 2.8.1 β-多样性分析介绍 |
| 2.8.2 PCA分析 |
| 2.8.3 Pcoa分析 |
| 2.8.4 3D-PCA/3D-Pcoa分析 |
| 2.8.5 NMDS分析 |
| 第三章 氯氰菊酯对雄性大鼠生殖系统的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 大鼠体重变化 |
| 3.2.2 肝脏器系数 |
| 3.2.3 睾丸脏器系数 |
| 3.2.4 精子数及精子活力 |
| 3.2.5 精子运动参数 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 氯氰菊酯对雄性大鼠肠道菌群的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 对雄性大鼠血常规指标的影响 |
| 4.2.2 对雄性大鼠肠道菌群的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 1 作者简历 |
| 2 攻读工程硕士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文数据集 |
（10）保精固元汤加减治疗DFI异常男性不育症的临床观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一西医对精子DNA损伤的认识 |
| 参考文献 |
| 综述二中医对男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究部分 |
| 临床资料 |
| 1 病例的来源 |
| 2 一般资料 |
| 病例选择 |
| 1 纳入标准 |
| 2 排除标准 |
| 3 剔除病例和脱落病例 |
| 研究方法 |
| 1 研究设计 |
| 2 治疗方法 |
| 3 观察指标 |
| 4 检测方法 |
| 5 统计方法 |
| 研究结果 |
| 1 入选病例 |
| 2 治疗前后检验指标疗效统计 |
| 3 精液参数、患者年龄、患者不育年限和患者中医症状评分与DFI相关性分析 |
| 4 治疗前后中医症状和西医疗效评价 |
| 5 患者BMI与精液参数和精子DFI值相关性分析 |
| 6 DFI异常程度、自然流产史和西医疗效评价比较 |
| 7 生活因素与治疗前后的西医疗效总结 |
| 结果分析 |
| 讨论 |
| 1 精液参数和精子DNA损伤与年龄、时间变化、职业、生活习惯的相关性 |
| 2 精子DNA损伤与精液常规参数的相关性 |
| 3 导师治疗DFI值异常男性不育症的经验 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
四、Sensitivity of sperm motility assay for detecting endotoxin effect on human sperm in vitro（论文参考文献）
- [1]益肾活血饮改善肾虚血瘀证VC患者SDF及胚胎质量的随机对照研究[D]. 袁启龙. 广州中医药大学, 2020(09)
- [2]在稀释液中添加虾青素对鸡精液保存效果影响的研究[D]. 施文. 广西大学, 2020(07)
- [3]蒙古马精液冷冻保存的研究[D]. 阿娜尔. 内蒙古农业大学, 2020(01)
- [4]褪黑素对牛冷冻保存精子的蛋白质组学研究[D]. 海超. 内蒙古大学, 2020
- [5]SLO家族在中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子发生过程中的表达及功能[D]. 张伟伟. 河北大学, 2020(08)
- [6]肠道菌群失衡诱发雄性小鼠生精障碍的研究[D]. 丁宁. 广东工业大学, 2020
- [7]猪精子能量代谢的调控机理研究[D]. 朱振东. 西北农林科技大学, 2020
- [8]犬精液低温保存及人工授精技术研究与应用[D]. 宋望成. 西北农林科技大学, 2020(02)
- [9]氯氰菊酯对雄性大鼠青春期生殖发育和肠道菌群的影响[D]. 邵帅. 浙江工业大学, 2019(03)
- [10]保精固元汤加减治疗DFI异常男性不育症的临床观察[D]. 林经洋. 北京中医药大学, 2019(05)