蟾蜍的脱落及其生产技术

一、蟾蜍的蜕衣及制作技术（论文文献综述）

房蕴歌^[1]（2020）在《以蟾酥为例探讨“TOE”思路下的动物药质量控制内涵研究》文中进行了进一步梳理动物药是中医药临床应用的三大组成之一,疗效确切,临床应用广泛。限于动物药自身化学组成复杂,分析难度大,与植物药相比,其基础研究薄弱,质量控制技术和水平亟待加强。Totality-of-the-evidence（TOE）,“证据链完备性”,是美国FDA《工业界植物药研发指南》推荐用于活性物质不清晰的植物药的质控思路,强调明确大类成分组成和从源头基原品种、采收加工到成品等过程的全成分质控,特别适合用于当前动物药的质量控制。蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B.melanostictus Schneider耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物,是国务院颁布的需要特殊管理的28种毒麻中药品种之一,也是42种国家重点保护的（二级）野生动植物药材品种。作为分泌物加工品,蟾酥缺乏平常药材（或饮片）固有的基原动物的外观形态,质量控制存在特殊困难。因此,本研究以蟾酥为例探讨“TOE”思路下的动物药质量控制内涵研究。蟾酥主要包括以蟾毒配基和吲哚生物碱为主的小分子和蛋白类物质,前期针对小分子物质在基原品种间的差异性以及初加工过程中的变化进行了研究,本论文采用Nano LC-MS/MS对其中蛋白类成分进行研究;综合前期小分子研究和本部分蛋白研究结果,建立基于整体质量控制策略的蟾酥药材和饮片质量标准。主要研究内容和结果如下:1、蟾酥药材蛋白组成分析通过提取溶剂种类、组成和p H值的考察,建立蟾酥药材总蛋白的提取方法,采用Bradford法测定了不同批次蟾酥药材总蛋白含量,47批干品蟾酥中总蛋白含量在6.90-28.3%。采用蛋白组学相关技术比较法定基原品种中华大蟾蜍和黑眶蟾蜍及近缘易混淆品花背蟾蜍和华西蟾蜍来源的蟾酥的蛋白组成差异性:（1）SDS-PAGE法对不同基原蟾酥样品进行分析,其蛋白条带具有明显差异。中华大蟾蜍、华西蟾蜍和花背蟾蜍在40-55 KD具有明显主条带,黑眶蟾蜍蟾酥在此处无明显条带,并且后者在>180 KD范围内有条带。中华大蟾蜍和华西蟾蜍之间,前者在130KD处无条带,后者此处条带清晰。中华大蟾蜍和花背蟾蜍之间,前者在25-35 KD条带清晰,后者在该范围无条带。（2）基于纳升液质联用技术,对4个基原（中华大蟾蜍、黑眶蟾蜍、华西蟾蜍和花背蟾蜍）的8个蟾酥样品进行差异蛋白分析,基于Proteome Discoverer 2.2平台检索cane toad.v2.2.proteins.fasta数据库,共鉴定到1357个蛋白,Gene Ontology基因功能注释和KEGG富集分析显示,鉴定到的蛋白包括氧化还原酶、水解酶和转运蛋白等,参与糖酵解、转运和翻译等多种生物学过程。通过统计学分析,法定基原（中华大蟾蜍、黑眶蟾蜍）区别于近缘易混淆品种的特有蛋白有49个、中华大蟾蜍和华西蟾蜍蟾酥区别于其它两个基原蟾酥的特有蛋白有26个、中华大蟾蜍蟾酥区别于其它三个基原蟾酥的特有蛋白有22个、黑眶蟾蜍蟾酥区别于其它三个基原蟾酥的特有蛋白有82个、花背蟾蜍蟾酥区别于其它三个基原蟾酥的特有蛋白有5个,华西蟾蜍蟾酥区别于其它三个基原蟾酥的特有蛋白有60个。根据差异蛋白鉴定时的高可信度肽段,得到各基原间相互区分的特征肽段:黑眶蟾蜍区别于其它三个基原的特征肽段ILKDQGYSTGIIGK,华西蟾蜍区别于其它三个基原的特征肽段QLLAGGMAGAVSR,中华大蟾蜍区别于黑眶蟾蜍的特征肽段SLLTGPSQLK,中华大蟾蜍区别于华西蟾蜍的特征肽段TGAFDWSHVAK,黑眶蟾蜍区别华西蟾蜍的特征肽段FLENLNNFVK,华西蟾蜍区别黑眶蟾蜍的特征肽段TTDMMFGGK、QVVEEPSPQLPAGK、MIGPFFDTLSTK、ITPADSQLQR、DLTAEQAAER和LVDNTEDWHPR,和黑眶蟾蜍区别花背蟾蜍的特征肽段YIAVIIHPDQK。利用SIEVE 2.0软件,导出质谱数据的质荷比、保留时间和峰面积,结合PCA和OPLS-DA分析,筛选得到不同基原间的特征离子:中华大蟾蜍（530.3290-15.40）与华西蟾蜍（964.5004-19.63、352.5574-18.11、1055.6564-18.31和527.3066-20.87）、中华大蟾蜍（461.2529-66.23和622.8214-65.24）与花背蟾蜍、黑眶蟾蜍（948.0197-65.76、1269.6597-67.10、512.3225-52.24、1269.6581-64.98和644.3872-40.02）与华西蟾蜍、黑眶蟾蜍（47个特征离子）与花背蟾蜍、华西蟾蜍（34个特征离子）与花背蟾蜍、花背蟾蜍与其它三个基原（8个特征离子）。（3）采用同一基原的鲜浆样品,考察烘干（105℃、80℃、60℃）、减压干燥（60℃）、冷冻干燥和阴干等不同干燥方式对蟾酥蛋白成分的影响。冷冻干燥样品加工前后颜色无明显变化,其它几种干燥方式样品加工后颜色有不同程度加深;蛋白含量测定结果为冷冻干燥>减压干燥>阴干>80℃烘干>60℃烘干>105℃烘干;SDS-PAGE分析显示105℃烘干样品蛋白条带比其它样品条带明显减少,60℃烘干样品条带数目与其它样品相同但条带颜色较浅,其它3种干燥方式没有明显区别。不同分析方法均提示蛋白成分随温度升高产生明显变化,推测部分蛋白在较高温度下发生降解。2、蟾酥药材和饮片质量标准的完善和提高综合前期小分子研究基础和本论文大分子的研究结果,考虑到标准提升要循序渐进,以兼顾当前中成药生产实际,现阶段仍以小分子蟾毒配基作为质量控制指标。在前期定性、定量分析方法的基础上,构建改进的蟾酥药材和饮片整体质量控制方法和标准,包含采用优化的薄层鉴别方法进行定性鉴别;采用【含量测定】项下的色谱条件建立HPLC特征图谱;完善一测多评法的相对校正因子,并将其用于38批蟾酥药材中蟾毒配基的含量测定,制定合理含量限度。在此基础上,参照药材拟修订方法,对不同批蟾酥粉进行【性状】、【鉴别】（薄层鉴别）、【特征图谱】、【检查】（水分）和【含量测定】等检测项研究,起草蟾酥粉的质量标准。具体为:（1）对【薄层鉴别】和【含量测定】项下的供试品溶液制备方法进行简化和统一,取【含量测定】项下的供试品溶液浓缩5倍作为【薄层鉴别】供试品溶液制备方法。（2）采用【含量测定】项下的色谱条件,建立以日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基共5个蟾毒配基类成分特征峰的HPLC特征图谱。（3）在前期一测多评法研究基础上,采用不同的计算方法（多点校正法和斜率法）计算不同检测波长对相对校正因子的影响。开展同一实验室不同操作者和不同实验室之间相对校正因子验证实验,确定华蟾酥毒基对日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵和蟾毒配基的相对校正因子分别为0.942、1.03、0.923和1.04。采用上述相对校正因子计算的38批蟾酥药材中5种蟾毒配基的总量与外标法测定结果无显着性差异。（4）根据38批蟾酥样品中5种蟾毒配基的总量,结合商品蟾酥质量现状,建议以干燥品计,5种蟾毒配基之和不低于9.0%。

韩忠良^[2]（2018）在《养殖龟与蟾蜍 扎根技术奔富路》文中研究说明在浙江省钱塘江畔的海宁市袁花镇,有一位年过古稀的特种养殖户蒋张林。他从1983年开始养殖龟鳖、狐狸、穿山甲等,至今已摸爬滚打走过了35年,从一个门外汉到精明的内行,从普通农民晋升到高级技师。在龟与蟾蜍养殖过程中,他始终坚持钻研和不断优化养殖技术并进,多项技术获得了专利。目前,他的养殖基地养有10多个品种的龟与蟾蜍。下面就让我们一起来了解一下他的创业故事吧。

韩忠良^[3]（2016）在《专利技术养龟与蟾蜍 携手学员走上致富路》文中提出当我们迈入专业养蟾蜍和龟的浙江省海宁市龙头阁两栖爬行动物研究所,走进该所蒋张林所长的办公室时,只见办公室墙上挂满了各种奖状、证书、证件、牌匾、锦旗,我们顿时对蒋所长油然而生敬佩之情。其办公桌上一字摆开的有嘉兴市科学技术协会颁发的"嘉兴市科技示范户"、嘉兴市人民政府颁发的"名牌产品"、海宁市工商局颁发的"文明经营户"等牌匾,最引人注目的是他数年来获得的国家知识产权局颁发的七项国家专利证书,其中有发明专利

韩忠良^[4]（2016）在《用专利技术养殖龟鳖、蟾蜍 敲开致富门》文中认为在浙江省钱塘江畔的海宁市袁花镇,有一位年过花甲的特种养殖户蒋张林。他从1983年就开始养殖龟鳖、狐狸、穿山甲等,兢兢业业,摸爬滚打走过了33年,经历了多次失败后最终取得了成功,从一个门外汉到精通技术的内行人,从普通农民到高级技师,用他自己的话说,其艰辛是常人所难以想象

韩忠良^[5]（2015）在《用专利技术养龟与蟾蜍 敲开致富门》文中指出在浙江省钱塘江畔的海宁市袁花镇,有一位年过花甲的特种养殖户蒋张林。他从1983年开始养殖龟鳖、狐狸、穿山甲等,兢兢业业、摸爬滚打走过了33年,其中经历了多次的失败,从一个门外汉到精明的内行,从普通农民晋升到高级技师。用他自己的话来说,其艰辛是常人所难以想象的。他的成功是与他严谨的科学思维、踏实的工作作风离

李海霞^[6]（2013）在《“农广天地”电视节目介绍》文中认为中央电视台第七套播出。时段一,首播:周一至周五14∶43-15∶13,重播:周二至周六6∶05-6∶35;时段二,首播:周一至周五、周日19∶00-19∶30,重播:周一至周日0∶12-0∶42。节目全文可登录:www.ngx.net.cn。《布老虎制作技术》布老虎是劳动人民从自己的审美情趣出发,巧妙地运用做衣服、做被褥剩下的废布头缝制而成,它既是儿童喜欢的玩具,又是流传于民间的一种精美工艺品。由于我国各地区、各民族风俗习惯不同,也给布老虎带来了不同的地

胡霞^[7]（2011）在《蟾皮提取物亲水凝胶骨架缓释片的制备及质量评价》文中指出目的:蟾皮是蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥表皮。因其提取物具有强心、抗肿瘤、局麻、镇痛、抗炎等作用而广泛应用于临床。但目前常用剂型如普通片剂、口服液、胶囊剂及注射液等存在服药次数多,服药量大,口服有腥臭味,注射导致血管刺痛,引发静脉炎等弊端。因此,有必要研究一种新剂型,从一定程度上改善现有剂型的不足。亲水凝胶骨架片（Hydrophilic Matrix Tablet）是以亲水性聚合物或天然胶类为骨架材料制成的片剂。是缓控释口服固体制剂中最简单、性价比最高的剂型。通过骨架材料遇水或消化液膨胀,形成的凝胶屏障控制药物的释放。其制备成本低、生产工艺简单、机械化程度高、释药性能好、质量稳定、服用方便,占据了上市骨架片的60%70%。本课题拟采用羟丙甲纤维素（Hypromellose,HPMC）为骨架材料制备蟾皮提取物亲水凝胶骨架缓释片,以减少服药次数,减少毒副作用和耐药性的产生,增强患者用药的顺应性。方法:对蟾皮提取工艺进行研究。建立HPLC方法测定蟾皮提取物中华蟾酥毒基的含量。考察干蟾皮吸水率及浸泡时间,采用传统的水提醇沉法,以加水量、煎煮次数和煎煮时间进行三因素三水平的正交试验,依照L9（34）正交表安排实验,以提取所得的浸膏量和其中华蟾酥毒基的含量为考察指标,采用综合加权评分法进行正交工艺的优选,筛选最佳提取工艺。并对筛选的最佳提取工艺进行验证。对蟾皮提取物进行质量评价。采用恒温水浴振荡法测定华蟾酥毒基在蒸馏水、pH6.8磷酸盐缓冲液、甲醇溶液中的溶解度。测定蟾皮提取物粉末的吸湿速率和临界相对湿度（Critical relative humidity,CRH）,为药物的生产和贮存条件提供参考数据。采用薄层色谱法对提取物进行定性鉴别。采用HPLC方法测定提取物中华蟾酥毒基的含量。采用《中国药典》2005版溶出度测定第三法小杯法进行缓释片体外释放度测定。建立HPLC方法,以缓释片体外释放2、6、10h时华蟾酥毒基的累积释放度分别达到15%35%、40%60%、70%为评价指标,考察了HPMC的粘度、填充剂的种类、润湿剂的种类、HPMC的用量、致孔剂的种类、致孔剂的用量、制粒方法以及压片力大小等处方工艺因素和释放介质的种类、释放介质的体积和是否使用沉降篮等方法学因素。采用直观的图表数据分析和相似因子f2分析相结合的方法,对不同处方释放度数据进行比较。并考察缓释片颗粒的吸湿速率以及临界相对湿度。参照《中国药典》2005版二部XIXD缓释、控释制剂指导原则和二部附录IA片剂项下的有关要求,对蟾皮提取物亲水凝胶骨架缓释片进行质量控制,对其外观性状、薄层定性鉴别、片重差异等各规定项目进行考察,建立HPLC方法测定其中华蟾酥毒基的含量并计算其体外累积释放百分率,绘制累积释放百分率-时间曲线。将数据分别用Zero、First、Higuchi、Peppas模型进行拟合,并对药物的释放机理进行研究。结果:采用HPLC方法测定蟾皮提取物中华蟾酥毒基含量,其专属性好,方法可靠。干蟾皮吸水率为150%,即首次煎煮要多加1.5倍量的水,浸泡30min。水提醇沉法最佳工艺为蟾皮加水煎煮3次,第一次加入11.5倍量的水浸泡30min,煎煮45min,第二次和第三次均加入10倍量的水煎煮45min。蟾皮提取物浸膏在pH6.8磷酸盐缓冲液、甲醇、蒸馏水三种溶剂中的溶解度依次为3.2mg·ml-1,3.1 mg·ml-1,2.5mg·ml-1。蟾皮提取物浸膏在相对湿度为75%的环境中放置10d吸湿达到平衡,吸湿百分率为54.1%。其临界相对湿度为56.33%。薄层色谱结果显示,供试品色谱在与标准对照品色谱相对应的位置上,显示相同颜色的一个斑点,表明供试品中含有华蟾酥毒基这一成分。HPLC法测得蟾皮提取物中华蟾酥毒基的含量为1.53mg·g-1。缓释片处方工艺筛选的结果表明:骨架材料的粘度对药物释放有显着性影响,随着HPMC粘度的增加,药物释放速率减慢,含有三种不同粘度的HPMC缓释片的体外释放速率大小顺序为K4M>K15M>K100M。作为填充剂的乳糖和微晶纤维素对药物释放均有促进作用,淀粉对药物释放影响较小。4种不同润湿剂制备的颗粒的休止角均小于30°,其中90%乙醇溶液制粒容易,不粘筛,但细粉较多;50%乙醇溶液制粒稍困难,易粘筛;2%PVP乙醇溶液制粒较难,易粘筛,细粉较多;70%乙醇溶液制粒容易,不粘筛,细粉较少。当骨架材料HPMC K4M的用量为10%时,药物出现突释情况,用量范围在15%30%时,释药曲线相似。表明随着骨架材料用量的增多,释药速率减慢,但当用量达到一定范围后,再增加用量对药物释放影响不大。采用甘露醇作为致孔剂能提高药物释放度,药物释放速率大小顺序分别为甘露醇>未加入致孔剂>PVP≈葡萄糖,致孔剂甘露醇的用量为5%和10%时,释放无明显差异,甘露醇用量增加到15%时释放速率明显加快,6h已接近释放完全。采用改进的分别制粒法比传统的总混制粒法对释药速率有明显的促进作用。压片力越大,药物释放越慢,但压力增加在一定范围内对药物释放无明显影响。因此缓释片的最优处方为:缓释片总重0.5g,其中蟾皮提取物40%,HPMC K4M 20%,甘露醇10%,剩余由MCC填充片重。最优工艺:70%乙醇溶液作为润湿剂,采用改进的分别制粒法制粒,即将蟾皮提取物总量的一半与HPMC K4M混合制粒,另一半与剩余辅料混合制粒。分别干燥后,混合均匀压片,即得。缓释片颗粒在相对湿度为75%的环境中放置96h吸湿达到平衡,吸湿百分率为24.87%,其临界相对湿度为72.81%。三批缓释片片重RSD值分别为0.51%、0.40%、0.44%,表明本缓释片三批样品片重差异符合规定。三批缓释片中华蟾酥毒基的平均含量分别为0.18mg、0.25mg、0.22mg,RSD分别为14.85%、1.02%、11.45%。释药模型拟合符合一级释药模型,释药机制为non-Fick扩散,表明药物释放为药物的扩散和骨架溶蚀协同作用的结果。结论:本试验制得的蟾皮提取物亲水凝胶骨架缓释片具有良好的12h缓释性,制备工艺的重现性和稳定性良好,建立的质量标准稳定可靠。

晓东^[8]（2006）在《蟾蜍的蜕衣及制作技术》文中研究指明

邹文华^[9]（2003）在《蟾蜍的蜕衣及制作技术》文中进行了进一步梳理

钟永平,保华,禄喜^[10]（2001）在《蟾蜍自然脱皮及加工方法》文中认为 1.蟾蜍品种的选择用来蜕衣的蟾蜍应体大、肉肥、健壮、无损伤,这是高产的基础。因此,宜选择中华蟾蜍及亚种和头盔蟾蜍、黑眶蟾蜍、盘谷蟾蜍、喜山蟾蜍等。这类蟾蜍种群大、分布地域广。要充分利用好蜕衣高产质优的年龄段,以2～3年龄的成年蟾蜍最好,此时生长旺盛。幼蟾蜕衣会影响生长发育,老蟾蜕衣质量差,产量低,均不宜选用。2.蜕衣前的准备在室内用玻璃围成长2.5米,

二、蟾蜍的蜕衣及制作技术（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、蟾蜍的蜕衣及制作技术（论文提纲范文）

（1）以蟾酥为例探讨“TOE”思路下的动物药质量控制内涵研究（论文提纲范文）

（2）养殖龟与蟾蜍 扎根技术奔富路（论文提纲范文）

（6）“农广天地”电视节目介绍（论文提纲范文）

（7）蟾皮提取物亲水凝胶骨架缓释片的制备及质量评价（论文提纲范文）

四、蟾蜍的蜕衣及制作技术（论文参考文献）

• [1]以蟾酥为例探讨“TOE”思路下的动物药质量控制内涵研究[D]. 房蕴歌. 天津中医药大学, 2020
• [2]养殖龟与蟾蜍 扎根技术奔富路[J]. 韩忠良. 农村百事通, 2018(03)
• [3]专利技术养龟与蟾蜍 携手学员走上致富路[J]. 韩忠良. 农村百事通, 2016(11)
• [4]用专利技术养殖龟鳖、蟾蜍 敲开致富门[J]. 韩忠良. 农村新技术, 2016(05)
• [5]用专利技术养龟与蟾蜍 敲开致富门[J]. 韩忠良. 农村百事通, 2015(13)
• [6]“农广天地”电视节目介绍[J]. 李海霞. 农民科技培训, 2013(05)
• [7]蟾皮提取物亲水凝胶骨架缓释片的制备及质量评价[D]. 胡霞. 河北医科大学, 2011(10)
• [8]蟾蜍的蜕衣及制作技术[J]. 晓东. 农村实用科技信息, 2006(05)
• [9]蟾蜍的蜕衣及制作技术[J]. 邹文华. 农村实用技术, 2003(02)
• [10]蟾蜍自然脱皮及加工方法[J]. 钟永平,保华,禄喜. 农村实用科技信息, 2001(09)

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