一、不育男性精浆转铁蛋白含量与精子顶体形态的关系（论文文献综述）
徐冰冰[1]（2021）在《基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究》文中研究说明内蒙古绒山羊是我国重要的地方种质资源。优秀种公羊冷冻精液的生产推广,能够提高种公畜的利用效率,加速育种工作进程,为生产带来更高的经济效益。但内蒙古绒山羊冷冻精液活力不稳定,情期受胎率低,解冻后精液品质具有明显的个体抗冻性差异。为了建立一种高效的内蒙古绒山羊精液冷冻保存体系,本研究以内蒙古绒山羊为研究对象,采集精液,利用统一的冷冻解冻程序进行精液抗冻性筛选,并将其分为高抗冻组（High Freezability,HF）和低抗冻组（Low Freezability,LF）,初步评估精子和精浆对内蒙古绒山羊精液抗冻性的影响。对内蒙古绒山羊HF组和LF组精浆进行蛋白质组-代谢组学联合分析,鉴定精浆中影响精液抗冻性的可能因素,其次利用脂质组学分析方法对内蒙古绒山羊HF组与LF组解冻后精子进行脂质差异表征。主要研究结果如下:（1）内蒙古绒山羊精液在冷冻-解冻后呈现抗冻性的个体差异,HF组冷冻解冻后精子各项运动参数以及结构完整性均显着高于LF组。精子和精浆的差异会影响精液抗冻性。（2）利用TMT（Tandem mass tags）标记定量蛋白质组学分析技术,从蛋白水平检测到HF组和LF组精浆间差异显着表达的蛋白质115个,HF组精浆中上调的蛋白质44个,LF组中上调的蛋白质71个。差异蛋白质GO（Gene Ontology）功能富集到22个生物学过程,14个细胞组分,10个分子功能。通过KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析,115个差异蛋白覆盖91条通路。差异表达蛋白中UQCRC1、DNAH1、APOA1、ADAM32、HTT、CADM1、STIP1是内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。（3）利用非靶向代谢组学分析技术,从代谢水平检测HF组和LF组精浆间的差异,在正、负离子电离模式下均能很好地将HF组与LF组精浆区分,二者具有明显代谢差异。在正离子模式下鉴定到HF组与LF组间差异代谢物23种,在负离子模式下鉴定到HF组与LF组间差异代谢物18种,富集到17条代谢通路。变量权重值（Variable Importance for the Projection,VIP）最大的前15种差异代谢物是柠檬酸盐、Pro-Arg、酮异己酸、乙酰肉碱、L-谷氨酰胺、次黄嘌呤、L-焦谷氨酸、20-羟基-前列腺素F2a、15-酮-前列腺素E1、L-亮氨酸、酪胺、泛酸、油酸、L-苯丙氨酸和二氢胸腺嘧啶,这些代谢物可以作为内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。（4）通过蛋白质组-代谢组学联合分析将得到的差异蛋白质和差异代谢物同时向KEGG通路投射,富集到11条通路,差异蛋白质和差异代谢物在矿物质吸收通路上显着富集,其中包含的差异蛋白为LOC102172488和FTH1,差异代谢物分别是L-谷氨酰胺、L-苯丙氨酸和L-亮氨酸。差异蛋白质TF与LOC102172488具有较高的序列一致性,且TF与FTH1均富集在矿物质吸收通路。TF与FTH1在HF组与LF组解冻后精子中均有表达,且LF组中TF蛋白的表达量显着高于HF组,HF组精子中FTH1蛋白的表达量显着高于LF组。检测HF组与LF组精浆中矿物离子的含量,发现HF组精浆中Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cr3+含量显着高于LF组。说明Fe的转运、氧化及储存可能影响内蒙古绒山羊精液抗冻性,且精浆中Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cr3+的浓度与精液抗冻性有关。（5）利用非靶向脂质组学分析内蒙古绒山羊HF组与LF组冷冻解冻后精子的脂质特征。在正、负离子电离模式下,HF组和LF组精子均能很好的区分,说明两者间存在差异显着的脂质特征。共鉴定到29个脂质亚类,1133个脂质分子,检测到显着差异脂质分子13个,分别其中3个属磷脂酰胆碱亚类（Phosphatidylcholine,PC）,10个属甘油三酯亚类（Triglyceride,TG）。说明精子膜上PC分子和TG分子能够显着影响内蒙古绒山羊精子冷冻耐受性。本研究为阐明内蒙古绒山羊精液抗冻性调控机制,基于多组学联合分析分别研究精浆和精子对抗冻性的影响。发现精子和精浆中均存在影响精液抗冻性的因素,并筛选到精浆中影响精液抗冻性的潜在生物标记,且精浆中矿物质离子含量与抗冻性有关;精子的脂质差异是影响解冻后精子活力的关键。通过以上研究,期望对内蒙古绒山羊精液抗冻性有更好的认识,为提高解冻后精液品质,建立内蒙古绒山羊精液冷冻保存体系提供理论依据。
褚长江[2]（2021）在《辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究》文中提出湖羊是太湖流域着名的绵羊品种,具有四季发情、一年多胎、生长发育快、耐高湿高温、性情温顺、适合舍饲等优良性状,也是我国一级地方保护品种。实现湖羊的规模化养殖需要人工授精技术的支持,精液的保存是人工授精技术的关键步骤,因为精液保存的质量决定着受胎率、母畜产子数。精液保存方式有三种:常温保存、低温保存和冷冻保存。常温保存因操作简单、生产成本低等优点在实际生产中应用居多。常温保存过程中,活性氧（Reactive oxygen species,ROS）对精液质量的影响最大。过量ROS的产生会导致氧化应激、细胞结构损伤、精子的受精能力下降等一系列不良反应。为防止精液体外保存过程中的氧化损伤,需要在精液稀释液添加适量的抗氧化剂抵抗氧化应激,从而提高精液常温保存的质量。本试验在湖羊精液常温保存稀释液中添加抗氧化剂辅酶Q10,对20℃保存的湖羊精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、活性氧（ROS）含量、丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性以及ATP含量、线粒体膜电位（MMP）、乳酸脱氢酶活性（LDH）等指标进行检测,探究辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果,以期辅酶Q10作为湖羊精液常温保存抗氧化剂的应用提供理论依据。本试验主要获得以下研究结果:1.湖羊精液常温保存过程中添加辅酶Q10,可以改善湖羊精液的常温保存效果,且辅酶Q10的最适添加浓度为50 μmol/L。保存第5 d,精子活率达81.70%,活力达73.70%,质膜完整率达33.41%,顶体完整率达76.00%,均显着高于其他组（P<0.05）;精子的平均曲线运动速率（VCL）、平均路径速度（VAP）、头部侧摆幅度（ALH）显着高于对照组（P<0.05）。这些结果表明,在常温保存过程中辅酶Q10对湖羊精液品质具有改善作用,最适添加浓度为50μmol/L。2.检测常温保存第1、3和5 d的精子细胞内ROS含量、MDA含量、SOD活性、CAT活性和T-AOC,发现50 μmol/L添加组的ROS和MDA显着低于其他组（P<0.05）,SOD、CAT、T-AOC显着高于其他组（P<0.05）。表明辅酶Q10可以通过清除细胞内多余的ROS,降低脂质氧化程度以及提高抗氧化酶活性来保护精子细胞,以防止精子在常温保存过程发生氧化应激反应。3.检测常温保存第3、5 d的精子细胞内ATP含量、线粒体膜电位以及LDH活性,发现50μmol/L添加组的ATP含量、线粒体膜电位、LDH活性显着高于其他组（P<0.05）。表明辅酶Q10能够增强精子的线粒体功能以及能量代谢。综上所述,本试验结果表明在湖羊精液常温保存过程中,向稀释液加入50 μmol/L的辅酶Q10可以减少精液在保存过程中的氧化损伤,同时可能参与精子细胞的代谢,参与到氧化磷酸化产生ATP,提高精液保存质量,为精液保存稀释液配方改进和人工授精的应用提供参考。
刘浩,张敏[3]（2020）在《精浆中微量元素与男性不育的关系探讨》文中研究说明目的:探讨精浆中微量元素与男性不育患者精子质量的关系。方法:选取2018年1月—2018年12月本院收治的不育男性100例为不育组,选取年龄与之相匹配的200例健康男性为对照组,检测两组精浆中锌、铜、铁、镁、钙及精液常规。结果:不育组精浆中锌、铁、钙含量均低于对照组（1409.3±114.0比1568.6±163.9,4.11±0.84比4.73±0.95,5.18±1.13比5.80±1.20）,铜含量高于对照组（4.75±0.80比3.32±0.66）,精子浓度、精子前向运动比例和精子活动度均低于对照组[（114.8±45.8）×106/ml比（136.2±48.1）×106/ml],[（49.4±7.8）%比（58.6±8.2）%],[（69.4±8.8）%比（78.5±10.4）%]（均P<0.05）;不育组精浆中锌、铁、钙含量与精子密度精子浓度、精子前向运动比例、精子活率精子活动度均呈显着正相关关系,铜含量与精子密度精子浓度呈负相关关系（均P=0.000）。结论:男性精浆中锌、铜、铁、钙含量与精液中精子密度、浓度及其活动能力具有密切关系,临床应在诊治男性不育中加以重视。
卞玉莹[4]（2020）在《精浆外泌体miRNA作为男性不育症新型分子标志物的临床研究》文中进行了进一步梳理研究背景:男性不育发病率逐年升高,已成为全球性的健康问题。男性不育症发病机制复杂,可由先天或继发性泌尿生殖系统异常、生殖腺感染、内分泌紊乱、精索静脉曲张、线粒体功能障碍或免疫紊乱等因素导致,其中特发性不育患者约占40%,其分子机制尚不完全清楚。目前临床上对男性不育的诊断主要基于精液常规和生化指标,然而这些检测缺乏较高的诊断特异性和敏感性,也忽略了男性不育的内在机制。睾丸活检虽然对男性不育,尤其是无精子症的诊断具有较高的准确性,但穿刺活检属有创性,可能引发并发症。因此,临床上仍需探寻男性不育症的新型非侵入性诊断标志物。最新研究表明精浆含有大量外泌体,来源于男性生殖系统多种细胞,由于精浆外泌体中mi RNA的含量会伴随外泌体起源细胞变化而改变,因此它能更精确反映生殖器官的病理生理变化,可作为潜在可靠的生物标志物。有报道显示,mi RNA在精子发生过程中发挥重要生理功能,但其在不育症精浆外泌体中的变化情况目前未见全面系统的报道。目的:全面系统地检测男性不育患者精浆外泌体mi RNA的表达谱,鉴定出在男性不育患者中显着改变的mi RNA,评价其作为辅助诊断男性不育生物标志物的可能性。方法:分别收集108例无精症、108例弱精症和108例年龄相匹配的正常男性精浆标本作为研究对象。利用UMI绝对定量转录组测序技术对精浆外泌体中的mi RNA测序分析,初步筛选出男性不育患者中显着变化的mi RNA。然后用试剂盒对所有精浆样本逐一提取外泌体,运用实时荧光定量PCR技术在复筛组和验证组中进行个体验证。最后运用ROC曲线分析、Spearman相关性分析及Logistic回归分析评价筛选出的mi RNA对男性不育症的辅助诊断价值。结果:UMI绝对定量转录组测序结果显示,与对照组相比,男性不育患者精浆外泌体mi RNA表达谱发生了明显改变。运用q RT-PCR技术进行复筛和验证,发现5种mi RNA（mi R-891a-3p、mi R-890、mi R-891b、mi R-892b、mi R-202-5p）在无精症患者精浆外泌体中显着稳定下调,2种mi RNA（mi R-7-5p和mi R-378e）在弱精症患者精浆外泌体中显着稳定上调（变化倍数≥2,P<0.05）。ROC曲线分析显示,7种mi RNA诊断男性不育症的ROC曲线下面积（AUC）为0.6860.778,其中mi R-892b的诊断准确性最高。进一步对这几种mi RNA进行Risk score分析,结果表明3-mi RNA（mi R-891b、mi R-892b、mi R-202-5p）组合的AUC值为0.785（95%CI:0.7210.850）,对无精症具有较高的诊断准确性;弱精症中mi R-7-5p和mi R-378e组合的AUC也高于单个mi RNA。此外,Spearman相关性分析显示,5种在无精症患者精浆外泌体中显着下调的mi RNA与精子浓度和精子活力呈显着正相关,而2种在弱精症患者精浆外泌体中显着上调的mi RNA与精子活力呈显着负相关。单因素逻辑回归分析显示,这些mi RNA均与男性不育症相关,是其潜在的危险因素（B>0,OR>1,P<0.05）。结论:男性不育症患者精浆外泌体mi RNA表达谱与正常对照相比存在显着差异,其中7种mi RNA在男性不育症患者精浆外泌体中发生了显着变化,这些mi RNA有望作为男性不育潜在的辅助诊断指标。
兰荣霞[5]（2020）在《人类精子和精浆糖蛋白位点特异性N-糖基化分析研究》文中研究指明精液由精子和精浆两部分组成,其中精子是携带遗传物质的主要载体,精浆为精子提供所需的营养和环境。精子和精浆的正常生理生化功能是成功受精的必然前提。蛋白质糖基化是最普遍的蛋白质翻译后修饰之一,参与精子发生、成熟直到受精的全过程。多项研究表明,精子和精浆中糖蛋白在受精过程中起着重要作用。因此本研究以人类男性精子和精浆为研究对象,利用本实验新建立的完整糖肽富集方法和自主新开发的Struc GP软件,从糖蛋白质组学水平上分析精子和精浆中糖蛋白、糖蛋白位点上的特异性N-糖基化以及聚糖成分和糖链结构的具体信息。通过分析正常可育精液中精子和精浆中糖蛋白以及位点特异性糖链结构,在男性精子样本中共鉴定到369个糖基化蛋白,2777个完整糖肽,401种糖链结构。在这些糖链结构中,高甘露糖型占3%,杂合型占到41.8%,复杂型聚糖达到53.2%。通过定性分析精浆中糖蛋白以及位点特异性糖链结构,在精浆样本中共发现369个糖基化蛋白,3267个完整糖肽,780种糖链结构。在精浆糖链结构中,高甘露糖型占2.31%,杂合型占40.59%,复杂型占56.17%。精子和精浆中含有许多特殊的糖链结构,通过比较精子和精浆糖蛋白和携带糖链结构的差异发现,精子中的高甘露糖和平分型糖占比高于精浆中高甘露糖和平分型糖占比,同时精子中携带唾液酸的糖链结构比精浆中丰富,而精浆中携带岩藻糖的糖链结构比精子中丰富。为进一步研究精子和精浆中糖蛋白的功能,我们通过DAVIDE对精子和精浆中糖蛋白进行GO功能分析发现,精子和精浆主要涉及酶促激活与蛋白连接功能。精子中糖蛋白主要参与精子获能、精卵识别以及受精过程;而精浆中糖蛋白功能主要涉及代谢过程、细胞粘附和蛋白水解以及辅助精子受精。本研究通过对健康可育精子和精浆中位点特异性糖蛋白以及糖链结构分析,构建了人类精子和精浆糖蛋白位点特异性及糖链图谱;应用生物信息学方法分析特异性糖蛋白功能,揭示了重要糖蛋白的糖链结构在受精过程中起到的作用和功能,并从糖蛋白组学和糖组学水平更好的诠释了精子和精浆在繁殖过程中的生物学功能,这为将来精子和精浆相关的糖蛋白组学研究提供了非常全面的数据基础。
邵勇维克[6]（2019）在《曲酸对猪常温保存精液体外受精的作用与机制研究》文中指出猪精液常温保存是人工授精的主要环节,细菌污染是公猪精液常温保存所面临的主要障碍之一。细菌污染会导致精子质量参数降低和产生氧化应激。公猪精液中活性氧（ROS）的含量是一把双刃剑,微量的ROS能维持精的获能及其他代谢功能;然而过量的ROS会导致精子DNA断裂,质膜破损和线粒体损伤等,影响精子的正常生理功能。曲酸为天然细菌代谢产物,其具有较强的抗菌能力。前期研究表明,添加曲酸能通过抑制细菌的生长来提高公猪精液常温保存质量和总抗氧化能力。本研究旨在于在精液稀释液中添加曲酸,并在17℃保存的第5天测定曲酸对公猪精子的精卵结合、体外受精参数、线粒体空泡化和固缩、抗凋亡蛋白、促凋亡蛋白,获能精子运动参数,蛋白质酪氨酸磷酸化和精子获能的影响。本研究获得的主要结果如下:1.添加0.04 mg/mL的曲酸显着提高卵母细胞结合精子数量、雌雄原核形成率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）。其中,最佳体外受精的精卵结合浓度为2.0×104,其能显着抑制多精入卵,促进早期胚胎发育（P<0.05）;2.添加0.04 mg/mL的曲酸能通过减少活性氧的产生降低线粒体空泡率和固缩,显着性抑制细胞色素C从精子线粒体释放至胞质（P<0.05）,促进精子抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达（P<0.05）,抑制促凋亡蛋白（Bax,Caspase-3和Caspase-9）的表达（P<0.05）;3.添加0.04 mg/mL的曲酸能显着提高获能后精子的运动参数,提高精子获能相关蛋白质酪氨酸磷酸化水平,提高获能成功型精子所占的比例,抑制精子发生顶体反应（P<0.05）。综上所述,添加0.04 mg/mL的曲酸提高了猪精卵结合率,促进了体外早期胚胎发育,其机制与提高获能精子蛋白质酪氨酸磷酸化水平与抑制精子凋亡有关。
金海峰[7]（2019）在《硒和维生素E对波尔山羊繁殖及公羔羊GPX基因表达的影响》文中研究表明硒（Selenium）具有抗氧化、增强免疫力、参与激素代谢、拮抗有毒金属元素及抗癌等作用;维生素E（Vitamin E,VE）具有抗氧化作用、免疫促进作用、维持生育等作用;VE和硒具有一定的协同作用。为确定山羊日粮中硒和VE的适宜添加范围,本论文开展了以下五部分研究内容。第一部分为消化代谢试验,试验选择24月龄母山羊,以3X2+1的处理方式被随机分成7个处理组（每组8只）。其中纳米硒（以下简称硒）三个水平（0.1、0.2、0.3 mg/kg）,VE两个水平（100和200 IU/kg）,研究日粮中添加不同剂量硒与VE对营养物质表观消化率的影响。第二部分研究内容为日粮添加硒和VE对母山羊繁殖性能的影响。本试验中,硒及VE添加量同试验一。试验研究补饲硒和VE对母山羊繁殖力、生殖激素水平、繁殖疾病的影响。第三部分试验为母山羊日粮添加硒与VE对新生羔羊生长和免疫的影响。试验母山羊以3×2+1因子的处理方式随机分成7个处理组（每组8只）。其中硒三个水平（0.1、0.2、0.3mg/kg）,VE两个水平（100和200 IU/kg）,研究其对羔羊生长及免疫的影响。第四部分研究内容为日粮添加硒与VE对山羊公羔羊精液品质及抗氧化酶活性的影响。试验山羊公羔羊以3×2+1因子的处理方式随机分成7个处理组（每组8只）。其中硒三个水平（0.2、0.3、0.4mg/kg）,VE两个水平（100和200 IU/kg）,研究对其山羊公羔羊精液品质及抗氧化酶活性的影响。第五部分研究内容为日粮添加硒与VE对公山羊组织中GPX基因mRNA表达量的影响。研究结果表明:1、在母山羊日粮中添加硒和VE对其采食饲料有一定的影响。其中G3组及G4组母山羊表明中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的采食量差异显着（P<0.05）;在母山羊日粮中添加硒和VE,显着降低了G3组及G4组粪中干物质及粗脂肪含量（P<0.05）;硒和VE的添加对其它各组粪中营养物质含量差异不显着。说明硒和VE的添加对饲料消化率的提高有促进作用。2、硒和VE对妊娠母山羊血清激素浓度影响与妊娠时期和添加剂量有关。硒及VE水平对母山羊妊娠120 d时,G1组、G2组、G3组、G5组母山羊血清促卵泡素（FSH）浓度影响显着高于对照组（P<0.05）;对母山羊妊娠30天、60天及90天血清雌二醇（E2）浓度的影响显着（P<0.05）;妊娠90天、120天母山羊血清孕酮（P）浓度影响显着（P<0.05）。对120天血清甲状腺素（T4）水平影响显着（P<0.05）。硒及VE水平对母山羊妊娠30天及60天血清中游离三碘甲腺原氨基酸（FT3）含量影响显着。硒和VE水平对母山羊妊娠90天血清游离甲状腺素（FT4）浓度的影响显着（P<0.05）。结果表明日粮中添加硒和VE,显着影响了母山羊血清激素水平。3、日粮添加硒和VE对新生羔羊生长和免疫具有促进作用。试验组母山羊初乳硒含量均显着高于对照组G0（P<0.05）;IgG及IgM含量显着高于对照组（P<0.05）;在羔羊达到30日龄时,试验组羔羊体重均显着高于对照组（P<0.05）;试验组羔羊平均日增重显着高于对照组（P<0.05）;试验组G3组、G4组及G6组羔羊平均体长日增长显着高于对照组（P<0.05）;试验组羔羊体高平均日长重显着高于对照组（P<0.05）;在羔羊达到30日龄时,试验组羔羊胸围均显着高于对照组（P<0.05）;试验组羔羊胸围日增长显着高于对照组（P<0.05）;试验组出生羔羊数高于对照组,死亡率均低于对照组,死亡率最低的为G3组和G4组,未出现有羔羊死亡。4、日粮添加硒和VE能够改善公羔山羊精液品质及抗氧化酶活性。日粮添加硒和VE均能显着降低精子畸形率（P<0.05）。除G1组外,日粮添加硒和VE能够使精子顶体完整率显着高于未添加组（P<0.05）;日粮添加硒和VE能极显着地增加精浆谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和总抗氧化能力（T-A0C）（P<0.01）。对照组公羔山羊精浆中超氧化物歧化酶（S0D）和过氧化氢酶（CAT）酶活性显着低于各补饲组（P<0.05）。丙二醛（MDA）浓度显着高于补饲组（P<0.05）。5、GPX-1、GPX-2、GPX-3、GPX-4基因mRNA在公羔山羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾丸中均有不同程度的表达;硒和VE的添加促进了GPX-1、GPX-2、GPX-3和GPX-4基因mRNA的表达。其中硒添加量为0.3 mg/kg,VE添加量为100 IU/kg时,各组织中GPX-1、GPX-2、GPX-3和GPX-4基因mRNA的表达量最高。综上研究表明日粮中添加硒和VE可改善母山羊的营养物质消化率,提高生产性能;促进子代羔羊生长发育、提高子代羔羊免疫机能及抗氧化性能;促进了公羔山羊组织中抗氧化性（GPX）基因的表达,为硒和VE对山羊影响机理的研究奠定基础。
陈厚仰[8]（2019）在《TDRG1蛋白在弱精子症中的作用及其机制》文中提出弱精子症又称精子活力不足,主要表现为精子的运动能力低下。流行病学调查发现弱精子症占男性不育的15%～25%,而且呈现逐年上升趋势。因此,研究弱精子症的发生、发展对男性不育的临床诊疗具有重要意义。弱精子症致病因素较多,包括生殖道感染、精索静脉曲张、内分泌紊乱、基因表达异常等等。目前对弱精子症相关基因的研究表明编码精子鞭毛组成蛋白和能量代谢有关蛋白等基因表达异常可引起精子活力下降,而这些基因中部分为睾丸特异性表达基因。这说明睾丸特异性表达基因可能参与调控精子运动。TDRG1（Testis Development Related Gene 1）是本人一直参与研究的睾丸特异性表达基因（Gen Bank accession No.DQ168992）。前期我们已证实TDRG1是灵长类动物特有基因,其在小鼠和大鼠睾丸中无同源基因表达,而在猕猴和黑猩猩睾丸中有同源基因表达。同时我们发现TDRG1在人睾丸生精细胞胞浆中都有表达,且随着生精细胞越成熟,TDRG1的含量越丰富。由此我们初步假设TDRG1可能参与调控人成熟精子的功能。为了证明这一假设,我们进行了深入的研究。本课题获得国家自然科学基金资助（项目编号81501317和81871207）,课题由以下四部分组成。第一章睾丸特异蛋白TDRG1在人成熟精子中的表达与定位目的:明确睾丸特异蛋白TDRG1在人成熟精子中的表达与定位。方法:利用免疫组化染色、RT-PCR、Western Blot和免疫荧光方法明确TDRG1在人成熟精子中的表达与定位。结果:免疫组化染色的结果发现随着生精细胞的成熟,TDRG1的含量也越丰富;RT-PCR和Western Blot的结果显示TDRG1在人成熟精子中有表达;免疫荧光的结果证实了TDRG1主要定位在精子的尾部（包括中段、主段和末段）。结论:TDRG1蛋白在人正常精子中有表达,且定位在精子尾部,为今后研究TDRG1在人成熟精子中的功能提供了理论依据。第二章穿膜肽携带重组蛋白TDRG1成功导入人成熟精子第一节穿膜肽TAT能携带EGFP成功导入人成熟精子目的:验证穿膜肽TAT能携带重组蛋白EGFP进入人成熟精子中,且对精子无影响。方法:首先构建重组质粒p ET28a-TAT-EGFP和p ET28a-EGFP-TAT的原核表达载体,其次表达和纯化融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT,最后将融合蛋白与正常人精子孵育,在荧光显微镜下观察融合蛋白的穿膜情况和精子运动参数的变化情况。结果:已成功构建了高表达重组质粒p ET28a-TAT-EGFP和p ET28a-EGFP-TAT表达载体,并表达和纯化了融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT。融合蛋白与精子孵育后荧光显微镜下观察到精子内有绿色荧光,精子的存活率及运动参数无明显影响。结论:穿膜肽TAT能将融合蛋白EGFP顺利导入精子中,且对精子无明显毒副作用,为精子胞浆蛋白研究提供了实验基础。第二节穿膜肽TAT能携带TDRG1成功导入人成熟精子目的:验证穿膜肽TAT能携带重组蛋白TDRG1进入人成熟精子中,并观察其穿膜效果。方法:首先构建重组质粒p ET28a-TAT-TDRG1的原核表达载体,其次表达和纯化融合蛋白TAT-TDRG1,最后将融合蛋白与正常人精子孵育,借助flag tag抗体和TDGR1抗体结合Western Blot方法检测TAT-TDRG1的穿膜情况和最适浓度。结果:已成功构建了高表达重组质粒p ET28a-TAT-TDRG1,表达和纯化了的融合蛋白TAT-TDRG1。Western Blot检测结果证实外源TDRG1已成功导入人精子内,且80μg/ml为最适穿膜浓度。结论:穿膜肽TAT能把融合蛋白TDRG1顺利导入人成熟精子中,为今后研究TDRG1在人成熟精子中的功能提供了实验基础。第三章TDRG1蛋白与弱精子症的相关性目的:初步探明TDRG1蛋白与弱精子症的相关性。方法:利用RT-PCR和Western Blot从核酸、蛋白水平阐明TDRG1与弱精子症的相关性;同时利用第二章制备的融合蛋白TAT-TDRG1,将其与弱精子症精子样本孵育,比较添加融合蛋白前后精子活力的变化,正面来评价TDRG1蛋白在弱精子症精子中的功能,进一步明确TDRG1与弱精子症的相关性。结果:核酸和蛋白水平的TDRG1在弱精子症精子中均下降;免疫荧光结果显示TDRG1在弱精子症精子中分布减少甚至消失。TDRG1含量与精子前向运动率线性正相关。融合蛋白TAT-TDRG1导入精子后不仅能增加正常人的PR值（增加约10%）,而且能显着增加弱精的PR（40%）。结论:TDRG1蛋白与弱精子症存在相关性,即TDRG1含量在弱精子症精子中明显降低,且与精子前向运动率线性正相关。融合蛋白TAT-TDRG1明显提升弱精子症精子的前向运动率。第四章TDRG1蛋白在弱精子症中作用机制目的:探索TDRG1蛋白在弱精子症中可能作用机制。方法:通过非标定量以及高分辨率液相色谱-质谱联用的定量蛋白质组学研究策略寻找TDRG1的可能相互作用蛋白,再利用免疫共沉淀技术验证TDRG1的可能相互作用蛋白质。结果:通过非标定量以及高分辨率液相色谱-质谱联用的定量蛋白质组学研究策略成功鉴定到5298个蛋白质,以差异倍数值变化超过1.5倍作为显着上调、小于1/1.5作为显着下调的变化标准找到632个差异蛋白,370例上调（其中与生殖相关蛋白41个）,262例下调（其中与生殖相关蛋白31个）。而表达下调的差异蛋白中我们分析预测CATSPER1与TDRG1存在相互作用。最后免疫共沉淀结果证实TDRG1与CATSPER1之间存在相互作用。结论:TDRG1可能通过CATSPER-Ca2+通路调控人精子运动。
夏雨果[9]（2019）在《从氧化应激角度研究三才连梅颗粒对糖尿病小鼠睾丸生精细胞自噬及凋亡的影响》文中提出糖尿病生精功能障碍是男性糖尿病人的常见并发症,也是引起男性不育的重要原因。研究表明男性糖尿病患者不育的发病率约为35.1%,随着近年糖尿病发病率升高以及发病年龄年轻化,糖尿病不育已成为影响男性生育的重要原因,氧化应激损伤与其密切相关,但具体机制不甚明确,并缺乏有效防治方法。“消渴”是中医对糖尿病的称谓,阴虚燥热是其辨证基础,糖尿病人久病耗气伤阴,气虚精亏,气虚运化无力,表现为气阴两虚,阴损及阳,所谓“阳化气、阴成形”,阴虚内热炽盛,阴液不足以濡养精室,发展为阳萎疲乏,精冷不育。三才连梅颗粒由人参、天冬、生地黄、乌梅、肉桂、黄连六味药组方而成,其方义遵循养阴清热为本,调和阴阳,并能益气健脾,培土生精。前期实验证实三才连梅颗粒具有较好的降血糖及抗氧化作用,临床观察发现三才连梅颗粒能有效提高糖尿病患者性功能及精液质量,改善中医症候。本课题拟用三才连梅颗粒治疗糖尿病生精功能障碍小鼠,观察其对糖尿病小鼠生精功能的影响,并通过Nrf2/HO-1氧化应激信号通路探讨其对生精细胞线粒体自噬及凋亡的影响。本实验通过高脂饮食及腹腔注射链脲霉素（STZ）建立2型糖尿病（T2DM）小鼠模型。将小鼠分为4组,分别为正常对照组（Ctrl）、糖尿病模型组（DM）、三才连梅组（DM/SCLM）、二甲双胍组（DM/DMBG）。其中DM/SCLM予以6g/kg三才连梅灌胃,二甲双胍组予以200mg/kg的二甲双胍灌胃,其余组予以等量生理盐水灌胃。治疗4周后取血查血糖、糖化血清蛋白、胰岛素等代谢相关指标;查血清FSH、LH、T等指标了解性激素的变化;取小鼠附睾检测精子参数相关指标;HE染色观察睾丸组织的病理改变,透射电镜观察生精细胞超微结构的改变;ELISA检测睾丸组织中SOD、MDA、8-OHdG了解氧化应激指标的变化;Western blot及qPCR检测睾丸Nrf2/HO-1信号通路的变化;通过检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3、P62及透射电镜观察自噬小体,了解生殖细胞线粒体自噬的变化;通过检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax及TUNEL染色,了解睾丸生精细胞凋亡的变化。结果表明三才连梅颗粒能有效降低T2DM小鼠空腹血糖（FBG）、糖化血清蛋白（GSP）,并改善胰岛素抵抗;三才连梅颗粒能增加T2DM小鼠睾丸组织抗氧化物酶SOD的表达,减少氧化应激产物MDA、8-OHdG的表达;提高血清T水平,提高T2DM小鼠睾丸指数,并提高精子密度、精子活力及精子存活率,睾丸组织切片中生精细胞凋亡明显减少,T2DM小鼠生精功能改善。同时三才连梅颗粒激活Nrf2/HO-1信号通路,减轻T2DM小鼠睾丸氧化应激损伤;降低自噬标志蛋白Beclin-1、LC3、P62的表达,减少生精细胞中自噬小体的形成,抑制生精细胞过度自噬;增加凋亡抑制基因Bcl-2的表达、减少促凋亡基因Bax表达,降低生精细胞凋亡,保护了T2DM小鼠睾丸生精功能。综上,三才连梅颗粒能有效减轻T2DM小鼠睾丸氧化应激损伤及生精细胞凋亡,其机制可能是激活Nrf2/HO-1氧化应激信号通路并抑制生精细胞过度自噬。以上结果表明三才连梅颗粒可用于防治糖尿病不育,具有良好的社会效益及经济价值,为中医药治疗糖尿病生精功能障碍提供新的思路。
李培飞[10]（2019）在《冬夏季猪精液质量特性及蛋白组学的比较分析》文中研究说明杜洛克猪自引入我国以来,经过多年驯化饲养,现已成为品种改良繁育的优质品种。然而,在不同季节杜洛克猪精液质量特性差异较大,尤其在夏季,精液体积和精子活力急剧下降,但夏季影响精液质量特性的分子机制尚未明确。因此,本研究运用蛋白质组学技术从能量代谢、氧化应激以及蛋白质翻译后修饰等方面探究夏季影响精子质量的分子机制,旨在为杜洛克猪精液质量特性的提升提供理论指导。本研究主要分为以下几方面工作:1、分析了蛋白磷酸化和乙酰化修饰水平与精子活力之间的相关性。利用Western-blot技术和细胞免疫荧光技术分析了新鲜精子和体外保存过程中精子的磷酸化和乙酰化修饰水平,并利用R软件分析了蛋白磷酸化和乙酰化修饰水平和精子活力之间的相关性。结果表明,新鲜精液中高活力精子的P-PKAs、PTP、Pan-Kac以及Tub-Kac水平均显着高于低活力精子;另外,随着体外保存时间的延长,精子的P-PKAs、PTP、Pan-Kac以及Tub-Kac水平也逐渐降低。R软件统计分析表明,在新鲜精液中,精子的P-PKAs水平（r=0.634,P<0.01）和Pan-Kac水平（r=0.380,P<0.05）与精子的活力呈显着正相关;在体外保存过程中,只有P-PKAs水平（r=0.607,P<0.01）与精子活力呈显着正相关。2、分析了夏季和冬季时精液的质量特性。利用CASA和流式细胞仪分析了冬夏季精液的常规质量参数及精子的结构完整性。结果表明,夏季时,精液的体积、精子活力、曲线运动速率和直线运动速率均显着低于冬季（P<0.05）,而精子密度却显着高于冬季（P<0.01）。另外,夏季时精子的质膜完整性、顶体完整性以及线粒体膜电位也显着低于冬季（P<0.01）。3、本研究运用Label-Free串联质谱技术定量分析了夏季和冬季精子、精清和精清外泌体的蛋白组成。分别从精子、精清和外泌体中鉴定出95种、97种和88种差异表达蛋白。生物信息学分析表明,夏季上调的蛋白（如,HSPA2、GSTP1、GAPDH、ALPL和ZPBP）主要参与热应激、氧化应激、能量代谢和蛋白质翻译后修饰等;而夏季下调的蛋白（如ARSA、MUC20和CDH1）则主要涉及精子的受精过程、细胞粘附和蛋白质磷酸化等。由此推测,精子的能量代谢、氧化应激及蛋白质翻译后修饰等方面的差异或许是造成精子在夏季和冬季时质量特性差异的重要原因。4、为了验证上述推测结果的可靠性,本研究又探究了夏季和冬季精子的ATP含量、活性氧含量（ROS）、丙二醛含量（MDA）、总抗氧化活性（T-AOC）以及蛋白磷酸化和乙酰化修饰水平。结果表明,夏季精子的ATP含量及T-AOC活性显着低于冬季（P<0.05）;而ROS和MDA含量则显着高于冬季（P<0.01）。另外,精子的P-PKAs、PTP、Pan-Kac和Tub-Kac水平也均显着低于冬季。综上所述,夏季影响精子质量特性的主要原因如下:一方面,夏季时,精子遭受剧烈的热应激和氧化应激,产生过量的ROS,造成精子结构完整性的破坏和线粒体膜电位的降低,使精子ATP合成受阻,导致精子活力下降;另一方面,夏季时,精子蛋白磷酸化和乙酰化修饰水平的降低也是导致精子活力降低的另一个重要原因。
二、不育男性精浆转铁蛋白含量与精子顶体形态的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、不育男性精浆转铁蛋白含量与精子顶体形态的关系（论文提纲范文）
（1）基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 山羊精液冷冻保存 |
| 1.2 影响精液抗冻性的因素 |
| 1.2.1 精浆 |
| 1.2.2 精子 |
| 1.2.3 冷冻保存程序 |
| 1.2.4 营养因素 |
| 1.3 蛋白质组学 |
| 1.3.1 TMT标记定量蛋白质组学概况 |
| 1.3.2 蛋白质组学在雄性生殖中的应用 |
| 1.4 代谢组学 |
| 1.4.1 非靶向代谢组学概况 |
| 1.4.2 代谢组学在雄性生殖中的应用 |
| 1.5 脂质组学 |
| 1.5.1 脂质组学概况 |
| 1.5.2 脂质组学在雄性生殖中的应用 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 1.7 技术路线图 |
| 2 研究一内蒙古绒山羊精液抗冻性筛选 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.2 试验动物 |
| 2.1.3 精液采集与稀释液配置 |
| 2.2 精液冷冻保存及抗冻性筛选 |
| 2.2.1 个体抗冻性的分类 |
| 2.2.2 去除精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.3 交换精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3 精子质量检测 |
| 2.3.1 精子运动性能检测 |
| 2.3.2 精子结构完整性检测 |
| 2.3.3 冷冻精液的人工输精 |
| 2.3.4 数据分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 绒山羊精液抗冻性的分类 |
| 2.4.2 去除精浆对精子抗冻性的影响 |
| 2.4.3 交换精浆对精子抗冻性的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 抗冻性对内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.5.2 抗冻性对去除精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.5.3 抗冻性对交换精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.6 小结 |
| 3 研究二基于TMT标记定量蛋白质组学对内蒙古绒山羊精浆抗冻性的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验样品 |
| 3.1.2 主要仪器与分析软件 |
| 3.1.3 主要试剂和耗材 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 蛋白质提取和肽段裂解 |
| 3.2.2 SDS-PAGE电泳 |
| 3.2.3 FASP酶解 |
| 3.2.4 TMT标记 |
| 3.2.5 High pH Reversed-Phase肽段分级 |
| 3.2.6 高效液相色谱-质谱分析(LC-MS/MS) |
| 3.2.7 蛋白质鉴定和定量分析 |
| 3.2.8 生物信息学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 蛋白质提取质控评价 |
| 3.3.2 质谱稳定性与重复性质控结果 |
| 3.3.3 蛋白质鉴定结果 |
| 3.3.4 差异表达蛋白质筛选 |
| 3.3.5 差异表达蛋白质聚类分析(Clustering) |
| 3.3.6 差异表达蛋白质Gene Ontology(GO)功能富集分析 |
| 3.3.7 差异表达蛋白质KEGG通路富集分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 研究三基于非靶向代谢组学对内蒙古绒山羊精浆抗冻性的研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验样品 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 样品预处理方法 |
| 4.2.2 色谱-质谱分析 |
| 4.2.3 数据处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 试验质量控制 |
| 4.3.2 数据分析 |
| 4.3.3 显着性差异代谢物筛选 |
| 4.3.4 差异代谢物聚类分析 |
| 4.3.5 差异代谢物KEGG通路分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 研究四蛋白质组-代谢组联合分析内蒙古绒山羊精浆抗冻性相关生物标记 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验样品 |
| 5.1.2 主要试剂与仪器 |
| 5.1.3 蛋白质组和代谢组联合分析 |
| 5.1.4 Western Blot实验步骤 |
| 5.1.5 精浆矿物质离子检测 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 差异蛋白质和差异代谢物KEGG通路整合分析 |
| 5.2.2 FTH1 蛋白和TF蛋白的Western Blot结果 |
| 5.2.3 内蒙古绒山羊精浆中矿物质离子浓度检测 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 6 研究五基于非靶向脂质组学对内蒙古绒山羊精子抗冻性的研究 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.1.1 试验样品 |
| 6.1.2 实验仪器和试剂 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 样本预处理方法 |
| 6.2.2 色谱-质谱分析 |
| 6.2.3 数据分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 试验质量控制 |
| 6.3.2 脂类化合物鉴定数量 |
| 6.3.3 脂质亚类(Lipid class)水平分析 |
| 6.3.4 脂质分子(Lipid species)水平分析 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 7 结论、创新点及展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（2）辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 羊精液保存技术研究进展 |
| 1.2 羊精液常温保存稀释液成分 |
| 1.2.1 营养物质 |
| 1.2.2 缓冲物质 |
| 1.2.3 抑菌物质 |
| 1.3 羊精液品质的评价指标 |
| 1.3.1 精子活力及运动性能 |
| 1.3.2 质膜完整完整性 |
| 1.3.3 精子顶体完整性 |
| 1.3.4 活性氧(ROS)含量 |
| 1.3.5 丙二醛(MDA)含量 |
| 1.3.6 总抗氧化能力(T-AOC) |
| 1.3.7 超氧化物歧化酶(SOD)活性 |
| 1.3.8 过氧化氢酶(CAT)活性 |
| 1.3.9 三磷酸腺苷(ATP)含量 |
| 1.3.10 线粒体膜电位(MMP) |
| 1.3.11 乳酸脱氢酶(LDH)活性 |
| 1.4 精子ROS的研究进展 |
| 1.4.1 内源性来源 |
| 1.4.2 外源性来源 |
| 1.5 氧化应激的影响 |
| 1.5.1 脂质过氧化 |
| 1.5.2 蛋白功能失调 |
| 1.5.3 细胞凋亡 |
| 1.5.4 DNA损伤 |
| 1.6 抗氧化剂应用进展 |
| 1.6.1 酶类 |
| 1.6.2 维生素 |
| 1.6.3 氨基酸及多肽类 |
| 1.6.4 植物提取物 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 1.7.1 本研究的目的 |
| 1.7.2 本研究意义 |
| 第2章 辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 数据统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子活率的影响 |
| 2.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子活力的影响 |
| 2.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子VAP和VCL的影响 |
| 2.2.4 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ALH的影响 |
| 2.2.5 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子质膜完整率的影响 |
| 2.2.6 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子顶体完整率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 辅酶Q_(10)对湖羊精液抗氧化能力的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 数据统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子T-AOC的影响 |
| 3.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子MDA含量的影响 |
| 3.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ROS含量的影响 |
| 3.2.4 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子SOD活性的影响 |
| 3.2.5 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子CAT活性的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 辅酶Q_(10)对湖羊精液能量代谢的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.3 数据统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ATP含量的影响 |
| 4.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子MMP的影响 |
| 4.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子LDH相对活性的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）精浆中微量元素与男性不育的关系探讨（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 指标检测方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组一般情况比较 |
| 2.2 两组精浆中微量元素水平比较 |
| 2.3 两组精液相关参数比较 |
| 2.4 不育组精浆微量元素与精液相关参数的相关性 |
| 3 讨论 |
（4）精浆外泌体miRNA作为男性不育症新型分子标志物的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 外泌体的研究背景 |
| 1.1.1 外泌体的发现、定义和组成 |
| 1.1.2 外泌体的生物形成与释放吸收 |
| 1.1.3 外泌体的功能 |
| 1.1.4 外泌体的分离和鉴定 |
| 1.2 miRNA的研究背景 |
| 1.2.1 miRNA的发现及来源 |
| 1.2.2 miRNA的结构及形成过程 |
| 1.2.3 miRNA的生物学作用机制及功能 |
| 1.3 精浆外泌体miRNA与男性不育的研究进展 |
| 1.3.1 男性不育概述 |
| 1.3.2 精浆miRNA与男性不育 |
| 1.3.3 精浆外泌体miRNA与男性不育 |
| 第二章 男性不育患者精浆外泌体miRNA的水平变化及临床意义 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 研究对象与精浆标本收集 |
| 2.1.2 实验所用仪器和试剂 |
| 2.1.3 精浆外泌体的提取 |
| 2.1.4 透射电子显微镜观察外泌体结构 |
| 2.1.5 精浆外泌体RNA的提取 |
| 2.1.6 UMI绝对定量转录组测序 |
| 2.1.7 qRT-PCR对 miRNA定量分析 |
| 2.1.8 精浆外泌体miRNA外源性参考基因的选择和数据处理 |
| 2.1.9 生物信息学预测miRNA靶基因 |
| 2.1.10 数据分析与统计 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 精浆外泌体形态结构鉴定 |
| 2.2.2 男性不育患者精浆外泌体miRNA UMI小 RNA测序结果 |
| 2.2.3 外源性MIR2911 作为外参定量精浆外泌体miRNA的依据 |
| 2.2.4 男性不育患者精浆外泌体miRNA表达谱的复筛与验证 |
| 2.2.5 男性不育患者精浆外泌体中7种miRNA的 ROC曲线分析 |
| 2.2.6 精浆外泌体miRNA与男性不育的风险评估 |
| 2.2.7 7种精浆外泌体miRNA与男性不育患者精液参数的相关性分析 |
| 2.2.8 靶基因预测结果 |
| 2.3 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表的文章 |
| 致谢 |
（5）人类精子和精浆糖蛋白位点特异性N-糖基化分析研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 精液生物学特征 |
| 1.2 男性不育症 |
| 1.2.1 课题背景 |
| 1.2.2 引起男性不育原因 |
| 1.2.3 诊断及其治疗措施 |
| 1.3 糖基化在精子受精前后中扮演的角色 |
| 1.3.1 推进精子发生 |
| 1.3.2 协助精子成熟 |
| 1.3.3 促进在女性子宫的存活 |
| 1.3.4 帮助精子获能 |
| 1.3.5 辅助精卵结合和受精 |
| 1.4 人类精液糖蛋白组学和糖组学研究进展 |
| 1.4.1 精子N-糖蛋白组和糖组学 |
| 1.4.2 精浆N糖蛋白组和糖组学 |
| 1.5 研究目的、内容以及意义 |
| 第二章 人类精子糖基化蛋白组学研究 |
| 2.1 试剂耗材、仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人类精子、精浆分离及蛋白质提取 |
| 2.2.2 精子样本蛋白酶解 |
| 2.2.3 酶解后的多肽除盐 |
| 2.2.4 精子糖基化肽段的富集 |
| 2.2.5 精子糖基化蛋白质组学质谱分析 |
| 2.2.6 精子糖基化蛋白质组学数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 人类精子中N连接完整糖肽谱图的构建 |
| 2.3.2 精子N-聚糖结构分析 |
| 2.3.3 精子N-糖基化蛋白分析 |
| 2.3.4 生物信息学富集分析 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 人类精浆糖基化蛋白组学分析 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 人类精浆中N连接完整糖肽谱图的构建 |
| 3.2.2 精浆N-连接聚糖结构分析 |
| 3.2.3 精浆N-连接糖蛋白分析 |
| 3.2.4 生物信息学分析 |
| 3.3 小结 |
| 第四章 比较精子和精浆糖基化蛋白 |
| 4.1 精子、精浆糖蛋白位点特异性比较 |
| 4.2 精子、精浆完整糖肽上糖链结构比较 |
| 4.3 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
（6）曲酸对猪常温保存精液体外受精的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 人工授精 |
| 1.2 公猪精液组成与功能 |
| 1.2.1 公猪精液组成 |
| 1.2.2 公猪精液功能 |
| 1.3 公猪精液体外保存 |
| 1.4 公猪精液常温保存检测指标 |
| 1.4.1 精子活率 |
| 1.4.2 精子质膜完整性 |
| 1.4.3 精子顶体完整性 |
| 1.4.4 精子线粒体膜电位完整性 |
| 1.5 公猪精液抗氧化检测指标 |
| 1.5.1 精子抗氧化防御系统 |
| 1.5.2 精子ROS含量 |
| 1.5.3 精子MDA含量 |
| 1.6 精子凋亡 |
| 1.7 精子获能 |
| 1.7.1 精子膜结构变化 |
| 1.7.2 精子蛋白质磷酸化水平 |
| 1.8 体外受精 |
| 1.8.1 精卵结合 |
| 1.8.2 早期胚胎发育前期 |
| 1.8.3 早期胚胎发育后期 |
| 1.9 曲酸的研究进展 |
| 1.9.1 曲酸的起源 |
| 1.9.2 曲酸的作用 |
| 试验研究 |
| 第二章 曲酸对猪常温保存精液体外受精的影响 |
| 2.1 试验材料和方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 数据处理 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 最佳受精浓度 |
| 2.2.2 曲酸对精卵结合影响 |
| 2.2.3 曲酸对精子雌雄原核形成的影响 |
| 2.2.4 曲酸对卵裂率的影响 |
| 2.2.4 曲酸对囊胚率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 曲酸对猪常温保存精液凋亡参数的影响 |
| 3.1 试验材料及方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 线粒体空泡化统计 |
| 3.2.2 细胞色素C |
| 3.2.3 凋亡蛋白表达 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 曲酸对猪常温保存精液精子获能的影响 |
| 4.1 试验材料和方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 .试验方法 |
| 4.1.3 .数据处理 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 曲酸对获能后精子运动参数的影响 |
| 4.2.2 曲酸对精子总蛋白酪氨酸磷酸化的影响 |
| 4.2.3 曲酸对精子CTC染色评估的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 进一步研究计划 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录 A |
| 附录 B |
| 附录 C |
| 附录 D |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）硒和维生素E对波尔山羊繁殖及公羔羊GPX基因表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 硒的研究进展 |
| 1.1.1 硒自然界的分布及存在形式 |
| 1.1.2 硒在动物体内的分布 |
| 1.1.3 硒的吸收与代谢 |
| 1.1.4 硒元素的生物学功能 |
| 1.1.5 反刍动物对硒的需求 |
| 1.1.6 纳米硒在反刍动物生产中应用 |
| 1.2 维生素E的研究进展 |
| 1.2.1 维生素E简介 |
| 1.2.2 维生素E的生物学功能 |
| 1.3 硒与维生素E的关系 |
| 1.3.1 硒与维生素E的协同作用 |
| 1.3.2 硒与维生素E不能相互代替 |
| 1.4 硒与维生素E的作用机理 |
| 1.5 母体营养对后代的影响 |
| 1.6 本研究的背景、目的及意义 |
| 1.7 研究创新点 |
| 第二章 硒与维生素E对母山羊营养物质消化率的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验日粮与设计 |
| 2.1.3 饲养管理 |
| 2.1.4 样品采集 |
| 2.1.5 测定指标及方法 |
| 2.1.6 数据处理 |
| 2.1.7 主要仪器设备 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 硒和维生素E对母山羊日粮中各营养物质采食量的影响 |
| 2.2.2 硒和维生素E对母山羊日粮中各营养物质排出量的影响 |
| 2.2.3 硒和维生素E对母山羊日粮中各营养物质表观消化率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 硒与维生素E对母山羊繁殖性能的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 试验日粮与设计 |
| 3.1.3 饲养管理 |
| 3.1.4 指标的测定 |
| 3.1.5 数据统计与分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 硒和维生素E对妊娠期母山羊血清生殖激素的影响 |
| 3.2.2 硒和维生素E对妊娠母山羊血清甲状腺激素浓度的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 硒与维生素E对新生羔羊生长和免疫机能的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 试验日粮与设计 |
| 4.1.3 饲养管理 |
| 4.1.4 样品的采集及检测 |
| 4.1.5 数据统计与分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 硒和维生素E对母山羊血清中硒和维生素E含量的影响 |
| 4.2.2 硒和维生素E对母山羊产后12h血清中免疫球蛋白含量的影响 |
| 4.2.3 硒和维生素E对母山羊初乳中硒、维生素E和免疫球蛋白含量的影响 |
| 4.2.4 硒和维生素E对新生山羊羔血清中硒、维生素E和免疫球蛋白含量的影响 |
| 4.2.5 硒和维生素E对新生山羊羔生长发育情况的影响 |
| 4.2.6 硒和维生素E对山羊羔断奶成活率的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 硒和维生素E对新生山羊羔免疫的影响 |
| 4.3.2 硒和维生素E对山羊羔生长发育情况的影响 |
| 4.3.3 硒和维生素E对山羊羔断奶成活率的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 硒与维生素E对公山羊精液品质及抗氧化酶活性的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 试验日粮与设计 |
| 5.1.3 饲养管理 |
| 5.1.4 样品采集 |
| 5.1.5 测定指标和方法 |
| 5.1.6 统计分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 硒和维生素E对公山羊精液品质的影响 |
| 5.2.2 硒和维生素E对公山羊精浆抗氧化酶活性的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 硒和维生素E对公山羊精液品质的影响 |
| 5.3.2 硒和维生素E对公山羊精液抗氧化酶活性的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 硒与维生素E对公山羊组织中GPX基因mRNA表达量的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 试验材料 |
| 6.1.2 试验试剂 |
| 6.1.3 引物设计合成 |
| 6.1.4 总RNA的提取和反转录 |
| 6.1.5 Real-timePCR |
| 6.1.6 数据处理 |
| 6.2 试验结果 |
| 6.2.1 RNA完整性检验 |
| 6.2.2 基因表达定量的标准曲线和溶解曲线 |
| 6.2.3 公山羊各组织器官中GPX基因mRNA相对表达量的差异 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 全文总结 |
| 7.1 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文目录 |
| 科技查新报告 |
（8）TDRG1蛋白在弱精子症中的作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一章 睾丸特异蛋白TDRG1在人成熟精子中的表达与定位 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 人睾丸组织免疫组化染色 |
| 1.5 人精子样品的纯化(Percoll密度梯度离心法纯化人精子) |
| 1.6 人精子diff-Quick染色 |
| 1.7 人精子总 RNA 的抽提(人睾丸组织总 RNA 的提取使用 Trizol 法) |
| 1.8 RNA逆转录合成c DNA |
| 1.9 PCR扩增TDRG1 序列 |
| 1.10 Western blot检测TDRG1 蛋白的表达 |
| 1.11 免疫荧光 |
| 1.12 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 TDRG1在成人睾丸的生精细胞中有表达 |
| 2.2 TDRG1在正常人成熟精子中被检测到,但非膜蛋白 |
| 2.3 TDRG1是胞浆蛋白,且主要分布在人成熟精子的尾部 |
| 3 讨论 |
| 第二章 穿膜肽-TDRG1融合蛋白成功导入人成熟精子 |
| 第一节 穿膜肽TAT能携带EGFP成功导入人成熟精子 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 重组质粒p ET28a-TAT-EGFP和p ET28a-EGFP–TAT的构建 |
| 1.5 TAT-EGFP和 EGFP-TAT在大肠杆菌中的表达及纯化 |
| 1.6 融合蛋白的穿细胞膜作用 |
| 1.7 融合蛋白对精子存活率及各项运动参数的影响 |
| 1.8 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组质粒p ET28a-TAT-EGFP和p ET28a-EGFP-TAT的构建 |
| 2.2 融合蛋白TAT-EGFP和 EGFP-TAT的表达、纯化与鉴定 |
| 2.3 TAT-EGFP和 EGFP-TAT导入人精子效果检测 |
| 2.4 TAT-EGFP和 EGFP-TAT融合蛋白对精子各项运动参数的影响检测 |
| 3 讨论 |
| 第二节 穿膜肽TAT能携带TDRG1 成功导入人成熟精子 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 TDRG1基因的克隆 |
| 1.5 酶切载体和PCR产物 |
| 1.6 酶切载体和酶切PCR产物的连接 |
| 1.7 热激转化到E.coli感受态细胞TOP10中 |
| 1.8 菌检PCR挑选阳性克隆后提取质粒测序比对 |
| 1.9 质粒转化与表达菌的培养 |
| 1.10 目的蛋白的诱导表达 |
| 1.11 电泳检测目的蛋白预表达情况 |
| 1.12 目的蛋白的大量表达 |
| 1.13 目的蛋白的纯化 |
| 1.14 TAT-TDRG1 融合蛋白导入精子的检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组质粒p ET28a-TAT-TDRG1 的构建 |
| 2.2 重组质粒的鉴定 |
| 2.3 融合蛋白的表达纯化和穿膜效果的检测 |
| 3 讨论 |
| 第三章 TDRG1蛋白与弱精子症的相关性 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 人精子样品的纯化(Percoll密度梯度离心法纯化人精子) |
| 1.5 RT-PCR检测弱精子症中精子的TDRG1 的含量 |
| 1.6 Western blot检测弱精子症中精子的TDRG1 蛋白的含量 |
| 1.7 免疫荧光 |
| 1.8 统计分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 TDRG1在弱精子症中的含量情况 |
| 2.2 TDRG1含量在弱精子症精子中明显降低,且与精子前向运动率线性正相关 |
| 2.3 TDRG1融合蛋白明显提升弱精子症精子的前向运动率 |
| 3.讨论 |
| 第四章 TDRG1在弱精子症中的作用机制 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 人精子蛋白提取 |
| 1.5 胰酶酶解 |
| 1.6 HPLC分级 |
| 1.7 液相色谱-质谱联用分析 |
| 1.8 数据库搜索 |
| 1.9 质谱质控检测 |
| 1.10 生物信息学分析方法 |
| 1.11 免疫共沉淀(CO-IP) |
| 2 结果 |
| 2.1 蛋白鉴定总览 |
| 2.2 差异表达蛋白的功能分类 |
| 2.3 差异表达蛋白的功能富集分析 |
| 2.4 聚类分析 |
| 2.5 蛋白质组学预测已鉴定的差异蛋白中运动相关蛋白的相互作用网络 |
| 2.6 免疫共沉淀结合+质谱分析预测TDRG1的可能相互作用蛋白 |
| 2.7 免疫共沉淀结果证实TDRG1和CATSPER1 为相互作用蛋白 |
| 3 讨论 |
| 全文总结及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
| 综述 弱精子症的病因和发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
（9）从氧化应激角度研究三才连梅颗粒对糖尿病小鼠睾丸生精细胞自噬及凋亡的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 附 研究技术路线图 |
| 第一部分 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠生精功能的影响 |
| 1.前言 |
| 2.实验药品及器材 |
| 2.1 实验药品 |
| 2.2 试验器材 |
| 2.3 实验试剂 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 实验动物及喂养 |
| 3.2 2型糖尿病小鼠模型的建立 |
| 3.3 实验分组 |
| 3.4 标本的收集 |
| 3.5 睾丸指数的测定 |
| 3.6 精子参数的测定 |
| 3.7 ELISA检测小鼠血清中FSH、LH及 T的含量 |
| 3.8 睾丸组织切片及HE染色 |
| 3.9 糖尿病相关指标的检测 |
| 3.10 统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠生精功能的影响 |
| 4.2 三才连梅颗粒对2型糖尿病小鼠代谢相关指标的影响 |
| 5.讨论 |
| 第二部分 三才连梅颗粒通过Nrf2/HO-1 信号通路对DM小鼠睾丸氧化应激损伤的影响 |
| 1.前言 |
| 2.实验器材及试剂 |
| 2.1 实验器材 |
| 2.2 实验试剂 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 实验标本 |
| 3.2 qPCR检测Nrf2及HO-1 mRNA的表达 |
| 3.3 western blot检测睾丸组织中Nrf2及HO-1 蛋白的表达 |
| 3.4 Elisa检测睾丸组织中MDA,SOD以及8-OHdG的含量 |
| 3.5 统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 三才连梅颗粒对Nrf2/HO-1 信号通路的影响 |
| 4.2 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠氧化应激产物的影响 |
| 5.讨论 |
| 第三部分 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠生精细胞线粒体自噬及凋亡的影响 |
| 1.前言 |
| 2.实验器材及试剂 |
| 2.1 实验器材 |
| 2.2 实验药品及试剂 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR) |
| 3.2 蛋白免疫印迹(Western Blot) |
| 3.3 电镜检测 |
| 3.4 TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling) |
| 3.5 统计学方法 |
| 4.结果 |
| 4.1 三才连梅颗粒对自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3Ⅱ/Ⅰ、P62 表达水平的影响 |
| 4.2 三才连梅颗粒对生殖细胞超微结构及自噬小体的影响 |
| 4.3 三才连梅颗粒对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的影响 |
| 4.4 三才连梅颗粒对睾丸生精细胞凋亡的影响 |
| 5.讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件1:文献综述 |
| 参考文献 |
| 附件2:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 附件3:在读期间立项课题 |
（10）冬夏季猪精液质量特性及蛋白组学的比较分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 精液质量特性 |
| 1.1.1 精子活力参数 |
| 1.1.2 精子结构完整性 |
| 1.1.3 精子线粒体膜电位 |
| 1.2 能量代谢状态与精子功能 |
| 1.2.1 糖酵解 |
| 1.2.2 氧化磷酸化 |
| 1.3 精子细胞的氧化应激 |
| 1.3.1 精子中ROS来源 |
| 1.3.2 ROS对精子结构和功能的影响 |
| 1.4 精子蛋白翻译后修饰的研究进展 |
| 1.4.1 精子蛋白磷酸化修饰 |
| 1.4.2 精子蛋白乙酰化修饰 |
| 1.5 精液外泌体 |
| 1.5.1 外泌体的分泌与组成成分 |
| 1.5.2 外泌体的分离纯化 |
| 1.5.3 精液外泌体对精子发育成熟的影响 |
| 1.5.4 精液外泌体对精子繁殖特性的影响 |
| 1.6 精液蛋白质组 |
| 1.6.1 精子蛋白质组 |
| 1.6.2 精清蛋白质组 |
| 1.7 本研究的内容及意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 蛋白质翻译后修饰与精子活力之间相关性的实验设计 |
| 2.2.2 冬夏季精液质量及蛋白组学的实验设计 |
| 2.2.3 精液的收集及预处理 |
| 2.2.4 精子活力参数测定 |
| 2.2.5 精子顶体完整性测定 |
| 2.2.6 精子质膜完整性测定 |
| 2.2.7 精子线粒体膜电位测定 |
| 2.2.8 精子T-AOC活性测定 |
| 2.2.9 精子ROS含量测定 |
| 2.2.10 精子MDA含量测定 |
| 2.2.11 精子ATP含量的测定 |
| 2.2.12 精子全蛋白的提取 |
| 2.2.13 SDS-PAGE和Western-Blot |
| 2.2.14 考马斯亮蓝染色 |
| 2.2.15 蛋白免疫印迹图像采集及灰度值分析 |
| 2.2.16 精子细胞免疫荧光 |
| 2.2.17 梯度离心分离精清外泌体 |
| 2.2.18 免疫磁珠吸附法纯化精清外泌体 |
| 2.2.19 质谱分析 |
| 2.2.20 透射电镜材料准备 |
| 2.3 数据分析 |
| 第三章 结果分析 |
| 3.1 蛋白磷酸化和乙酰化修饰与精子活力之间的相关性 |
| 3.1.1 精子活力参数 |
| 3.1.2 高活力组和低活力组精子蛋白磷酸化水平的差异 |
| 3.1.3 高活力组和低活力组精子蛋白乙酰化水平的差异 |
| 3.1.4 蛋白磷酸化和乙酰化修饰与新鲜精液中精子活力之间的相关性 |
| 3.1.5 体外保存过程中精子蛋白磷酸化水平的差异 |
| 3.1.6 体外保存过程中精子蛋白乙酰化水平的差异 |
| 3.1.7 体外保存过程中精子活力与蛋白质磷酸化和乙酰化之间的相关性 |
| 3.1.8 精子磷酸化蛋白的免疫荧光定位 |
| 3.1.9 精子乙酰化蛋白的免疫荧光定位 |
| 3.1.10 不同活力精子的线粒体膜电位 |
| 3.1.11 不同活力精子的顶体完整性 |
| 3.2 夏季与冬季杜洛克猪精液质量特性的比较 |
| 3.2.1 夏季与冬季杜洛克猪精液质量参数比较 |
| 3.2.2 夏季与冬季杜洛克猪精子的结构完整性的比较 |
| 3.3 夏季与冬季杜洛克猪精液蛋白组成的比较 |
| 3.3.1 精子、精清以及精清外泌体的蛋白质组鉴定结果 |
| 3.3.2 精子、精清以及精清外泌体差异蛋白的鉴定结果 |
| 3.3.3 GO富集分析根据细胞定位对差异蛋白进行分类 |
| 3.3.4 GO富集分析根据分子功能对差异蛋白进行分类 |
| 3.3.5 GO富集分析根据生物过程对差异蛋白进行分类 |
| 3.3.6 差异蛋白间的STRING蛋白互作网络分析 |
| 3.3.7 部分差异蛋白及其关联蛋白间的STRING蛋白互作网络分析 |
| 3.3.8 精子差异蛋白的Western-Blot验证 |
| 3.3.9 精清差异蛋白的Western-Blot验证 |
| 3.3.10 外泌体差异蛋白的Western-Blot验证 |
| 3.4 夏季与冬季杜洛克猪精子能量代谢及氧化应激的比较 |
| 3.4.1 夏季与冬季杜洛克猪精子能量状态的比较 |
| 3.4.2 夏季与冬季杜洛克猪精子的氧化应激及抗氧化特性的比较 |
| 3.5 夏季与冬季杜洛克猪精子蛋白质翻译后修饰的比较 |
| 3.5.1 夏季与冬季杜洛克猪精子蛋白质磷酸化的比较 |
| 3.5.2 夏季与冬季杜洛克猪精子磷酸化蛋白的免疫荧光定位 |
| 3.5.3 夏季与冬季杜洛克猪蛋白质乙酰化的比较 |
| 3.5.4 夏季与冬季杜洛克猪精子磷酸化蛋白的免疫荧光定位 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 蛋白质翻译后修饰与精子活力之间的相关性 |
| 4.1.1 蛋白质磷酸化与精子活力的相关性 |
| 4.1.2 蛋白质乙酰化与精子活力的相关性 |
| 4.2 夏季与冬季杜洛克猪精液质量参数的差异 |
| 4.3 夏季与冬季精液蛋白组成的差异 |
| 4.3.1 夏季与冬季杜洛克猪精子的氧化应激差异 |
| 4.3.2 夏季与冬季杜洛克猪精子能量代谢的差异 |
| 4.3.3 夏季与冬季杜洛克猪精子蛋白质翻译后修饰的差异 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
四、不育男性精浆转铁蛋白含量与精子顶体形态的关系（论文参考文献）
- [1]基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究[D]. 徐冰冰. 内蒙古农业大学, 2021
- [2]辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究[D]. 褚长江. 扬州大学, 2021(09)
- [3]精浆中微量元素与男性不育的关系探讨[J]. 刘浩,张敏. 中国计划生育学杂志, 2020(07)
- [4]精浆外泌体miRNA作为男性不育症新型分子标志物的临床研究[D]. 卞玉莹. 江苏大学, 2020(02)
- [5]人类精子和精浆糖蛋白位点特异性N-糖基化分析研究[D]. 兰荣霞. 西北大学, 2020(02)
- [6]曲酸对猪常温保存精液体外受精的作用与机制研究[D]. 邵勇维克. 西北农林科技大学, 2019
- [7]硒和维生素E对波尔山羊繁殖及公羔羊GPX基因表达的影响[D]. 金海峰. 延边大学, 2019(01)
- [8]TDRG1蛋白在弱精子症中的作用及其机制[D]. 陈厚仰. 南昌大学, 2019(06)
- [9]从氧化应激角度研究三才连梅颗粒对糖尿病小鼠睾丸生精细胞自噬及凋亡的影响[D]. 夏雨果. 成都中医药大学, 2019(04)
- [10]冬夏季猪精液质量特性及蛋白组学的比较分析[D]. 李培飞. 上海交通大学, 2019(07)