一、禽用重组鸡痘病毒活载体疫苗研究及其应用（论文文献综述）
董炳梅[1]（2019）在《鸡新城疫病毒增殖培养细胞系的筛选与稳定表达唾液酸转移酶（ST6Gal）细胞株的构建及其应用》文中研究说明鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）可在多种原代或传代细胞系上复制增殖,但不同毒株或亚型对宿主细胞均存在偏嗜性。为了筛选适于鸡新城疫（Newcastle disease,ND）疫苗生产的传代细胞系,本研究将我国ND疫苗株NDVⅠ系与Lasota株分别接种BHK-21、Vero、Hela、鸡肝癌细胞（LMH细胞）与DF-1细胞,通过对细胞病变的观察,结合对细胞培养物细胞半数感染量(Median cell culture infective dose,TCID50)和HA效价的测定,对比确定适于NDVⅠ系与Lasota株生长的传代细胞系。结果显示,NDVⅠ系与Lasota株在Vero、BHK-21、DF-1、Hela与LMH细胞上均可增殖,并引起典型的细胞病变,但不同毒株适应细胞的能力不同。较适于NDVⅠ系增殖的细胞系依次为Hela、BHK-21与DF-1细胞;较适于NDV Lasota株增殖的细胞系依次为Hela、LMH与BHK-21细胞。本研究证明了NDVⅠ系与Lasota株均可在LMH细胞上增殖,并产生典型的细胞病变,且LMH细胞更适于NDVⅠ系的增殖培养。NDV侵染细胞的第一步是病毒与细胞膜表面的唾液酸受体结合,NDV的唾液酸受体主要包括Neu5Ac-α-2,3Gal-β-1,4Glc（SAα2,3Gal）和Neu5Ac-2-S-α-2,6Gal10Me（SAα2,6Gal）,两种受体在宿主组织器官中的分布及表达丰度的不同对病毒的宿主范围和毒力等方面具有重要影响。为了在分子水平解释NDVⅠ系与Lasota株对不同细胞系的偏嗜性,本研究首先应用激光共聚焦显微镜对2种唾液酸受体在BHK-21等5种细胞上的分布进行了观察,结果显示,BHK-21、LMH、DF-1、Hela与Vero细胞内均存在TSA-R SAα2,6Gal与SAα2,3Gal,且主要分布于细胞膜与细胞质中;在细胞核部分,BHK-21细胞核有SAα2,3Gal受体分布,而DF-1细胞核中两种受体均有分布。其次,本研究应用流式细胞仪对5种细胞膜表面的两种唾液酸受体进行了定量分析,结果显示5种细胞表面SAα2,3Gal受体的含量显着高于SAα2,6Gal受体,提示5种细胞主要以SAα2,3Gal受体为主;按由多到少排列,SAα2,3Gal在5种细胞膜上的含量依次为Hela、BHK-21、DF-1、LMH与Vero细胞;SAα2,6Gal在5种细胞膜上的含量依次为Hela、LMH、BHK-21、Vero与DF-1细胞。结合NDVⅠ系与Lasota株在不同细胞上的增殖特性的比较,可判断NDVⅠ系更易与SAα2,3Gal受体结合,NDV Lasota株更易与SAα2,6Gal受体结合。NDV虽然可在多种细胞上增殖培养,但效价普遍较低,不能达到生产要求。NDV的两种唾液酸受体分别为SAα2,3Gal和SAα2,6Gal,而介导两种唾液酸受体形成的酶类分别是ST3Gal转移酶和ST6Gal转移酶,因此唾液酸转移酶对唾液酸受体在细胞表面的表达具有重要作用,而细胞表面受体表达丰度的高低对病毒入侵与增殖具有决定性作用。因此,为了提高NDV细胞培养效价及进一步确定不同唾液酸受体对NDV细胞培养的影响,本研究以PCI-neo为载体,在成功构建唾液酸转移酶PCI-neo-ST3与PCI-neo-ST6质粒的基础上,应用脂质体转染的方法将其分别转染BHK-21细胞,共获得22株BHK-ST3细胞与17株BHK-ST6细胞;进而将NDV Lasota株分别接种以上细胞,通过HA效价及TCID50的测定,分别获得了较适于NDV Lasota株增殖的BHK-ST3-22细胞与BHK-ST6-15细胞克隆株。流式细胞仪检测发现,BHK-ST3-22细胞与BHK-ST6-15细胞表面相应的唾液酸受体表达丰度均有显着提高,且BHK-ST6-15细胞较BHK-ST3-22细胞更适合于NDV Lasota株的增殖。为了提高NDV在BHK-ST6-15细胞株的增殖效价,本研究在对应用BHK-ST6-15贴壁细胞增殖培养NDV Lasota株的条件进行优化的基础上,一方面将BHK-ST6-15细胞进行低血清悬浮培养的驯化;另一方面对NDV Lasota株在悬浮培养的BHK-ST6-15细胞上增殖条件进行了优化。结果显示,成功实现了BHK-ST6-15细胞的低血清悬浮培养,应用该细胞增殖培养NDV Lasota株,其细胞培养液效价可达108.375 TCID50/0.1 mL,显着高于BHK-ST6-15贴壁细胞,从而为实现NDV Lasota株细胞悬浮培养产业化生产奠定了良好基础。我国家禽活疫苗的生产主要依靠接种SPF鸡胚制备而成,该工艺主要存在批次间稳定性差、家禽外源病毒污染的风险和鸡胚废弃物无害化处理等问题,因此,影响着家禽活疫苗的生产。为替代传统鸡胚生产工艺、提升产品质量与效益,本研究应用全悬浮细胞培养技术生产NDV Lasota株活疫苗,并根据《中华人民共和国兽药典》2015年版三部的要求对其进行检测。结果显示,NDV Lasota株活疫苗各项指标均符合要求,可完全替代传统鸡胚生产工艺。同时,该技术具有技术成熟、自动化程度高、安全性强、产品质量稳定等优点,且显着降低了生产成本、提高了经济效益,从而为全悬浮细胞培养技术生产NDV Lasota株活疫苗奠定了良好基础。
谢青梅,封柯宇,沈勇[2]（2019）在《动物病毒重组活载体疫苗研究进展》文中认为病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活载体疫苗的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。
李丹丹[3]（2016）在《高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的制备》文中研究说明鸡痘是由鸡痘病毒（Fowlpox virus,FPV）引起的一种急性、接触性传染病,广泛发生于养禽业中,各年龄和品种均易感,但以雏鸡的敏感性最高,在临床上主要表现为皮肤型、黏膜型和混合型。该病在世界范围内均有发生,主要使用鸽痘疫苗和鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗进行免疫预防。近年来,由于毒株变异引发的FPV感染报道不断增加,给养禽业造成极大的经济损失。特别是2009年发生于吉林省公主岭某大型种鸡场的一起皮肤型鸡痘疫情,导致1万只褐种蛋鸡于46日龄发病后10日内全部死亡,给该病的有效防控再次敲响了警钟,同时也给现有的部分商品化疫苗的有效性带来了挑战。为了进一步完善鸡痘疫苗的免疫保护效果,本研究以当前流行的鸡痘病毒为种毒开展了灭活疫苗的实验室研究工作。课题组前期从吉林省公主岭暴发的皮肤型鸡痘疫情病死鸡体内分离获得一株高致病性鸡痘病毒,命名为FPV JL 09C2。经基因组测序发现,该FPV基因组内整合了近全长的禽网状内皮组织增生病病毒（REV）的基因。本研究选用FPV JL 09C2型毒株作为种毒,进行了高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的研究。通过试验确定毒株在鸡胚上最佳的接毒剂量和收毒时间,即用150 ul病毒液接种SPF鸡胚培养5 d后收毒为最佳条件。在此条件下对病毒扩大培养,并选用甲醛作为灭活剂对病毒进行灭活,确定3‰的甲醛处理24 h可使病毒完全灭活。依据《兽用生物制品规程》配制铝胶佐剂,按与灭活病毒1:9的比例混合,制备好的疫苗按照国家标准进行细菌检验,采用PCR扩增技术对支原体进行检验。按照上述生产工艺制备鸡痘病毒灭活疫苗进行后续的研究。对研制的灭活疫苗进行了最小免疫剂量的测定以及免疫效果的评价。研究结果显示,该疫苗对雏鸡的最小免疫剂量是0.2 ml。随后对制备的疫苗进行安全性检验,结果显示,以一次单剂量、单剂量重复和一次超剂量接种实验动物后,经临床观察、体温测定和病理观察等证明本疫苗不产生临床副作用,具有良好的安全性。通过ELISA检测,雏鸡接种疫苗后2-3周FPV抗体水平达到最高,最高OD450可达到0.55,但各组血清中均未检测到REV抗体的存在;淋巴细胞增殖实验检测,与PBS组相比,灭活疫苗组CD3+CD4+T淋巴细胞百分比升高CD3+CD8+T淋巴细胞的百分比无明显变化;灭活疫苗免疫组和经特异性抗原刺激后,处于高度活化状态;对细胞因子检测证明该疫苗可刺激鸡产生特异性的免疫应答,且以Th2型免疫应答为主。通过对接种疫苗的鸡攻毒,保护率可达到85%,对疫苗的保存期进行测定,疫苗在4℃和室温环境下分别保存9和3个月,其物理性状以及免疫效力未变化,这与灭活疫苗特性相同。由此可见,本实验室制备的FPV灭活疫苗可以有效的刺激机体产生免疫应答,从而达到预防该病的目的。该疫苗的研制对鸡痘有效预防具有重要意义。
冯书营,董仕桢,张树逍[4]（2013）在《H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状及应用前景》文中指出H5N1亚型禽流感病毒是目前发现的禽流感病毒中感染性最强、致死率最高、流行最广的一类病毒,该病毒已在世界上多个国家发生流行,给禽类养殖业带来了巨大的经济损失。当前针对该病尚无高效特异的治疗方法,进行疫苗的接种是目前最为有效的预防措施和关键环节。因此,研制安全、高效、廉价的新型疫苗成为当前禽流感防制工作的热点之一,且取得了大量的研究成果。作者从禽流感病毒灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗和RNAi技术应用等方面对H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状作一综述,归纳出该领域中存在的问题和不足,并对禽流感疫苗的应用前景作一展望,以期为深入进行禽流感的防制研究提供参考。
刘存霞[5]（2013）在《鸡痘病毒282E4株基因组和蛋白质组解析、载体构建与HIV重组疫苗研究》文中研究指明鸡痘病毒（Fowlpox virus, FPV）是脊椎动物痘病毒科、禽痘病毒属的代表成员,该病毒仅感染禽类,可引起禽类动物的疾病。因禽痘病毒通常不感染人与其他哺乳动物,且能有效表达大量的外源DNA,并可在感染细胞的胞浆中复制等特点而成为活病毒载体研究的热点。然而,目前对FPV的基因组、结构、毒力、致病机制、宿主范围及其免疫逃逸等方面尚无系统深入的研究。为设计出更加安全、有效的FPV表达载体系统,本研究以FPV282E4株为研究对象,开展其基因组背景分析、蛋白质组成、新型表达载体构建及重组鸡痘病毒载体疫苗筛选和实验免疫研究。本研究首先采用高通量Illumina测序技术对中国弱毒疫苗株FPV282E4株进行全基因组测序,通过对测序数据组装后利用基因预测软件进行基因de novo预测及功能注释。结果测定FPV282E4全基因组为308829bp,GC含量约为28%,预测出313个编码序列（Coding sequence, CDS）,并与FPVUS株、CNPV ATCC株进行核酸平等共线性分析,通过功能注释表明FPV282E4的基因具有核营酸代谢、运输、转录、复制、重组、修复及翻译后修饰、伴侣蛋白和信号转导功能。在此基础上,采用LC-ESI-MS/MS对鸡痘病毒282E4株进行蛋白质全谱分析,鉴定出76个蛋白,对其进行功能注释,结果与基因组序列相互印证,从而为重组鸡痘病毒载体构建及感染与致病机制研究奠定理论基础。基于FPV282E4全基因组序列测定数据,针对本实验室前期在鸡痘病毒载体构建中遇到的重组效率较低、筛选周期长等问题,本研究优化FPV282E4株5个非必需CDS区作为候选同源重组臂,通过插入含有PE/L早／晚期启动子和终止信号的三基因表达盒,进行重组鸡痘病毒载体的构建,分别以红、绿、蓝三种荧光蛋白基因作为报告基因,进行病毒重组及外源基因表达活性的验证。荧光蛋白表达检测结果表明,三个表达盒均可独立表达外源基因；通过对rFPV进行形态学、生物特性检测,结果成功构建出3个rFPV,且基因缺失未影响重组鸡痘病毒的形态及其复制,3株重组鸡痘病毒无差异。在成功获得表达载体的基础上,以本实验室前期构建的包含HIV-1复合多表位（MEGNp24）、CpG基序和CTB基因（CCMp24）的免疫原为基础,构建表达HIV-1复合多表位的rFPV-CCMP24,通过荧光噬斑筛选纯化rFPV-CCMP24。采用PCR、RT-PCR、Western Blot方法进行重组病毒及外源基因表达的鉴定。成功获得rFPV-CCMp24,重组病毒复制效率及病毒滴度与野生株FPV一致,重组病毒能够在体外表达外源基因且具有反应原性。然后开展了rFPV-CCMp24的小鼠免疫试验,分析其免疫原性,同时结合前期构建的重组痘苗病毒rddVTT-CCMp24进行联合免疫研究,通过检测特异性HIV-1抗体、淋巴细胞刺激指数、淋巴细胞分泌IFNy以及流式细胞术检测CD3+CD4+、CD3+CD8+等指标,综合分析免疫效果,探寻有效的病毒载体为基础的免疫策略。结果显示,rFPV-CCMp24单独免疫及与rddVTT-CCMp24联合免疫,均能诱导细胞免疫及体液免疫。本研究为研制有效鸡痘病毒活载体疫苗及多载体疫苗联合免疫的临床前实验研究奠定了基础。
张文慧,钱爱东[6]（2011）在《禽流感基因重组活载体疫苗和表位疫苗的研究进展》文中认为为了解禽流感新型疫苗的研究现状,从载体选择和候选基因等方面论述了基因重组活载体疫苗和表位疫苗的研究进展,并对这两种疫苗的发展前景进行了展望,以期为禽流感新型疫苗的研究提供参考。
左颖,孙德君,郑德福,姜丽萍[7]（2011）在《鸡新城疫基因工程疫苗的研究进展》文中研究表明新城疫（newcastle disease,ND）又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的一种急性、高度接触性传染病,主要侵害鸡和火鸡,其他禽类和野禽也能感染,亦可感染人,
胡博[8]（2010）在《Asia 1型、O型FMDV复合多表位口服疫苗构建与实验免疫研究》文中进行了进一步梳理本研究利用网络服务器对多株Asia 1型、O型FMDV结构蛋白VP1进行表位预测,同时参考已知的Asia 1型、O型FMDV抗原活性位点,设计并合成FMDV多表位盒。将分子佐剂CTB和FMDV辅助性T细胞表位连入多表位盒中,构建Asia 1型、O型FMDV复合多表位基因盒CTEAs和CTEO。将Asia 1型、O型FMDV衣壳蛋白前体P1/2A分别与复合多表位基因相连,利用毕赤酵母进行分泌表达,将纯化的表达产物P1/2A-CTEAs、P1/2A-CTEO、CTEO和CTEAs腹腔免疫小鼠,证明复合多表位均可刺激小鼠高水平的体液免疫和细胞免疫的产生,说明设计的FMDV复合多表位具有良好的免疫原性,其中尤以P1/2A-CTEAs（Asia 1型）和P1/2A-CTEO（O型）免疫组效果最佳。将Asia 1型FMDV复合多表位基因与其结构蛋白VP1-2A基因相连,利用枯草芽孢杆菌分泌型表达载体pBC38C,构建了可稳定表达目的蛋白的重组枯草芽孢杆菌1A751/CTB-VP1/2A-CTEAs、1A751/CTEAs和1A751/CTEO,并以口服的方式（1010/只）进行小鼠免疫实验,并检测特异性血清抗体、T淋巴细胞的增殖和IFN-γ的分泌、黏膜总sIgA和黏膜特异性sIgA。证实重组枯草芽孢杆菌既可刺激体液免疫和细胞免疫的产生,同时对机体黏膜免疫也有显着地诱导作用,其中以重组枯草芽孢杆菌1A751/CTB-VP1/2A-CTEAs口服免疫效果最佳。构建了稳定表达FMDV复合多表位的重组酿酒酵母INVSc1/P1/2A-CTEAs、INVSc1/P1/2A-CTEO、INVSc1/CTEAs和INVSc1/CTEO,并以口服的方式（108/只）进行小鼠免疫实验。说明重组酿酒酵母不仅可以刺激体液免疫和细胞免疫的产生,而且对机体黏膜免疫也有显着地诱导作用,其中以重组酿酒酵母INVSc1/P1/2A-CTEAs和INVSc1/ P1/2A-CTEO口服免疫效果最佳。利用prime-boost免疫策略对多种疫苗联合免疫效果进行研究。以本室构建的Asia 1型、O型FMDV核酸苗pVAX-P1-2A-3C（Asia 1型）和pIRES3CP1（O型）为首免,使用重组鸡痘病毒vUTAL-P1-2A-3C（Asia 1型）和vUTAL3CP1（O型）加强免疫,并于每次免疫的同时灌服本实验中效果较好的重组活菌载体疫苗。明确口服活菌载体疫苗能显着提高prime-boost免疫策略下疫苗联合免疫的效果,显着提高机体细胞免疫、体液免疫以及黏膜免疫水平,其中以重组枯草芽孢杆菌和重组酿酒酵母混合制剂口服免疫效果最佳。
吴俊铭,叶喜永,李强[9]（2010）在《禽用基因工程疫苗的研究和应用进展》文中进行了进一步梳理随着现代生物技术不断应用于生物制品,近年来禽用基因工程疫苗研究逐渐成为热点并已有商品化产品,在禽类疾病防控上发挥着重要作用。本文将对禽用基因工程疫苗的实验室研究和应用进展做以介绍。
郭抗抗[10]（2010）在《猪瘟病毒的shRNA干扰、强弱毒鉴别及基因工程疫苗研究》文中研究指明猪瘟（Classical swine fever ,CSF）是严重危害养猪业的传染性疾病,病原为猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）。CSFV为单股正链RNA病毒,研究发现其3′非翻译区（3′-non-translation region,3′-NTR）在病毒的复制中有重要作用,为了研究CSFV Shimen株3′-NTR的不同位点在病毒复制中的作用,筛选3个靶位点设计了短发夹RNA（shRNA）,构建了针对shimen株CSFV 3′-NTR 3个靶位点的shRNA表达质粒;将重组质粒转染PK-15细胞,获得3株稳定靶向CSFV Shimen株3′-NTR 3个靶位点的干扰细胞株,接种CSFV后,检测干扰细胞株对病毒复制的影响。目前CSF防控上采取的是以疫苗免疫接种为主的策略,弱毒疫苗的大范围使用,使病毒变异、毒力返强的风险增高,当前临床上“非典型”CSF的大量出现,被怀疑与弱毒疫苗的大量使用有关,新型CSF疫苗的研制是防控CSF的需要;在分析国内外有关猪瘟基因工程疫苗研究进展的基础上,构建了表达CSFV Shimen株E2基因的“自杀性”DNA疫苗和同时表达CSFV Shimen株E0和E2基因的重组鸡痘病毒,对构建的疫苗进行了初步评价。CSF弱毒疫苗的大量使用,使在生产中难以有效地用血清学方法区分野毒感染猪和疫苗免疫猪,对生猪及其产品的贸易造成严重影响;针对这个问题,在借鉴已有研究的基础上,建立了区分CSFV强/弱毒株的RT-PCR方法,通过对临床病料的检测表明,该方法的特异性较强,可用于临床上对CSFV野毒感染和弱毒疫苗免疫猪的鉴别检测。本研究取得以下结果:1.通过对CSFV Shimen株3′-NTR核苷酸序列的分析,分别设计了靶向CSFV Shimen株3′-NTR 115～132位、137～154位和210～228位mRNA的短发夹RNA（shRNA）的单链核苷酸,经退火后形成双链shRNA,将其分别与siRNA表达质粒载体连接,构建了编码CSFV Shimen株3′-NTR 3个位点shRNA的表达质粒载体;转染细胞后筛选获得了稳定转录靶向CSFV Shimen株3′-NTR shRNA PK-15细胞株（P-1、P-2和P-3）;接毒试验表明,细胞株P-1、P-2及P-3在转录水平和蛋白表达水平上均可干扰CSFV Shimen株在感染细胞中的增殖（P<0.05）。2.建立了可鉴别CSFV强毒和弱毒的RT-PCR方法。在CSFV强毒中可扩增得到187 bp的片段,弱毒可获得492 bp的片段;在对PCV2、TGEV、PRRSV等猪源病毒的检测,均未有PCR产物出现,说明方法的特异性较高。对临床疑是CSF病料的检测证明,建立的方法可有效地区分CSFV野毒感染猪和弱毒疫苗免疫猪,本方法可用于临床上对CSFV强弱毒的鉴别检测。3.构建了CSFV E2基因“自杀性”DNA疫苗表达质粒载体PSCA1-E2。在转染细胞中可检测到E2蛋白的表达;免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖刺激指数（SI）在二免后10d与对照组差异显着（p<0.05）,20d和30d差异极显着（p<0.01）;试验猪二免后21d能检测到抗CSFV特异性血清抗体,说明构建的表达CSFV E2基因的“自杀性”DNA疫苗能诱导试验动物的免疫反应。4.将CSFV E0和E2基因及报告基因LacZ插入到鸡痘病毒FV282的复制非必需区,经同源重组构建了一株含CSFV E0和E2基因的重组鸡痘病毒（FV282-E0-E2）。用重组鸡痘病毒免疫接种试验小鼠和试验猪,检测发现,免疫动物均能产生特异性抗体,说明E0和E2基因在机体细胞内得以有效表达,并能激发机体产生免疫反应;对免疫猪的攻毒试验表明,重组鸡痘病毒免疫猪能获得部分的免疫保护,抵抗CSFV强毒的攻击,免疫保护率为75%（6/8）。
二、禽用重组鸡痘病毒活载体疫苗研究及其应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、禽用重组鸡痘病毒活载体疫苗研究及其应用（论文提纲范文）
（1）鸡新城疫病毒增殖培养细胞系的筛选与稳定表达唾液酸转移酶（ST6Gal）细胞株的构建及其应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 鸡新城疫病毒研究进展 |
| 1.1 副黏病毒概述 |
| 1.2 NDV的病原学概述 |
| 1.3 NDV分子生物学特性 |
| 1.4 NDV在宿主细胞内的复制增殖 |
| 第二章 新城疫病毒受体研究进展 |
| 2.1 病毒受体特性 |
| 2.2 NDV的唾液酸受体 |
| 2.3 与唾液酸受体相关的酶类 |
| 2.4 影响NDV与受体结合的因素 |
| 2.5 NDV唾液酸受体的分布 |
| 2.6 NDV培养特性 |
| 第三章 新城疫疫苗研究概况 |
| 3.1 常规疫苗 |
| 3.2 新型疫苗--基因工程疫苗 |
| 第二篇 实验研究部分 |
| 第一章 不同细胞系培养NDV特性的研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 唾液酸受体SAα2,3Gal和 SAα2,6Gal在不同细胞系表达的比较 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 表达唾液酸转移酶细胞株的建立与筛选 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 NDV Lasota株在BHK-ST6-15 细胞上培养条件的优化 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 基于BHK-ST6-15 全悬浮细胞培养的NDV Lasota株活疫苗的试验研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 发表的学术论文 |
| 致谢 |
（2）动物病毒重组活载体疫苗研究进展（论文提纲范文）
| 1 痘病毒活载体疫苗 |
| 2 疱疹病毒活载体疫苗 |
| 3 腺病毒活载体疫苗 |
| 4 新城疫病毒活载体疫苗 |
| 5 其他动物病毒载体疫苗 |
| 6 展望 |
（3）高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 鸡痘病毒研究进展 |
| 1.1 定义与分类 |
| 1.2 鸡痘病毒形态结构和理化特性 |
| 1.3 鸡痘病毒的分子生物学特点 |
| 1.4 鸡痘病毒的致病性 |
| 1.5 FPV感染的诊断 |
| 1.6 鸡痘病毒的免疫特性 |
| 1.7 鸡痘的预防和治疗 |
| 1.8 FPV与禽网状内皮增生病病毒的整合 |
| 第二章 鸡痘疫苗的研究进展 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 高致病性鸡痘病毒JL 09C2灭活疫苗的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 高致病性鸡痘病毒JL 09C2株灭活疫苗的保护性及安全性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（4）H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状及应用前景（论文提纲范文）
| 1 H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状 |
| 1.1 全病毒灭活疫苗 |
| 1.2 减毒活疫苗 |
| 1.3 基因工程疫苗 |
| 1.3.1 H5N1基因工程亚单位疫苗 |
| 1.3.2 H5N1重组活载体疫苗 |
| 1.3.3 H5N1核酸疫苗 |
| 1.4 RNA干扰技术在禽流感防制中的应用 |
| 2 H5N1亚型禽流感病毒疫苗的开发前景 |
| 2.1 建立新型的基因工程疫苗表达系统是今后研究工作的重要方向之一 |
| 2.2 复合型或多价型基因工程疫苗的研究仍是今后研究工作的热点领域 |
| 2.3 新型免疫佐剂的开发也是今后值得探索的重要领域 |
| 2.4疫苗的用药方式、用药途径和最佳药量等内容需进一步确立 |
（5）鸡痘病毒282E4株基因组和蛋白质组解析、载体构建与HIV重组疫苗研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 基因组学和蛋白质组学研究进展 |
| 1 基因组学研究进展 |
| 2 蛋白质组学研究进展 |
| 第2章 禽痘病毒及其载体系统研究进展 |
| 1 禽痘病毒生物学特性 |
| 2 禽痘病毒载体及其应用 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 鸡痘病毒282E4株全基因组测序及序列分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第2章 鸡痘病毒282E4株全谱蛋白质组鉴定与分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第3章 新型鸡痘病毒穿梭载体的构建及功能验证 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第4章 表达HIV-1复合表位重组鸡痘病毒的构建与筛选 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第5章 HIV-1复合表位多载体疫苗联合免疫实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 |
| 导师及作者简介 |
| 致谢 |
（7）鸡新城疫基因工程疫苗的研究进展（论文提纲范文）
| 1 亚单位苗 |
| 2 活载体疫苗 |
| 2.1 疱疹病毒活载体疫苗 |
| 2.2 痘病毒活载体疫苗 |
| 2.3 减毒沙门杆菌活载体疫苗 |
| 3 基因缺失疫苗 |
| 4 新城疫病毒载体疫苗 |
| 5 DNA疫苗 |
| 6 研究展望 |
（8）Asia 1型、O型FMDV复合多表位口服疫苗构建与实验免疫研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 口蹄疫的研究进展 |
| 1.1 FMD 的历史和影响 |
| 1.2 FMD 的病原 |
| 1.3 FMD 的临床症状 |
| 1.4 FMD 的感染途径 |
| 1.5 FMD 的亚临床症状和持续感染 |
| 1.6 FMD 的分子流行病学 |
| 1.7 FMDV 的疫苗研究 |
| 1.8 FMD 的防控 |
| 第2章 口蹄疫疫苗研究进展 |
| 2.1 口蹄疫传统疫苗研究 |
| 2.2 口蹄疫新型疫苗的研究 |
| 2.3 展望 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 Asia1 型、O 型 FMDV 复合多表位基因盒的设计与分析 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 Asia1 型、O 型 FMDV 复合多表位基因在毕赤酵母中的表达及小鼠免疫实验研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 Asia1 型、O 型 FMDV 复合多表位基因在枯草芽孢杆菌中的表达及小鼠免疫实验研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 Asia1 型、O 型 FMDV 复合多表位基因在酿酒酵母中的表达及小鼠免疫实验研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 FMDV 复合多表位口服疫苗与多种FMDV 基因工程疫苗联合免疫实验研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 |
| 导师简介 |
| 致谢 |
（9）禽用基因工程疫苗的研究和应用进展（论文提纲范文）
| 1 目前已商品化的禽用基因工程疫苗 |
| 1.1 H5禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗 |
| 1.2 H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗 |
| 1.3 鸡传染性喉气管炎和鸡痘基因工程活载体疫苗 |
| 1.4 重组新城疫病毒活载体双价疫苗 |
| 2 处于实验室研究阶段的禽用基因工程疫苗 |
| 2.1 病毒活载体疫苗 |
| 2.2 基因工程亚单位疫苗 |
| 2.3 核酸疫苗 |
| 2.4 转基因植物疫苗 |
| 3 小结及展望 |
（10）猪瘟病毒的shRNA干扰、强弱毒鉴别及基因工程疫苗研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒研究进展 |
| 1.1 猪瘟研究进展 |
| 1.1.1 猪瘟概述 |
| 1.1.2 猪瘟的病原 |
| 1.1.3 猪瘟的临床症状 |
| 1.1.4 猪瘟的流行病学 |
| 1.1.5 猪瘟的致病机理 |
| 1.1.6 猪瘟的诊断 |
| 1.1.7 猪瘟的防控 |
| 1.2 猪瘟病毒研究进展 |
| 1.2.1 猪瘟病毒的基本形态和理化特性 |
| 1.2.2 病毒的基因型 |
| 1.2.3 猪瘟病毒基因组结构 |
| 1.2.4 病毒主要基因的功能 |
| 1.3 猪瘟疫苗研究进展 |
| 1.3.1 传统的CSF 疫苗 |
| 1.3.2 猪瘟基因工程疫苗 |
| 试验研究 |
| 第二章 干扰猪瘟病毒shimen 株3′-NTR shRNA 表达载体的构建 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株与质粒 |
| 2.1.2 主要工具酶及试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 靶向CSFV 3′-NTR 区段小干扰RNA（siRNA）序列的选取及设计 |
| 2.2.2 编码短发夹RNA（shRNA）序列的DNA 单链设计与合成 |
| 2.2.3 重组表达质粒的构建 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 重组质粒构建模式图 |
| 2.3.2 重组质粒的测序 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 转录靶向CSFV Shimen 株3′-NTR shRNA 细胞株的建立及对CSFV 增殖干扰研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 质粒、毒株、菌株和细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 重组pGenesil-1 表达质粒的纯化 |
| 3.2.2 重组干扰表达载体转染PK-15 细胞 |
| 3.2.3 稳定转录靶向CSFV Shimen 株3′-NTR shRNA PK-15 细胞株的获得 |
| 3.2.4 阳性细胞株CSFV 增殖的干扰 |
| 3.2.5 CSFV 增殖干扰效果的检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组干扰载体的纯化 |
| 3.3.2 G418 最佳筛选浓度 |
| 3.3.3 G418 筛选及阳性细胞克隆的获得 |
| 3.3.4 转录靶向CSFV Shimen 株3′-NTR shRNA PK-15 细胞株的获得 |
| 3.3.5 PCR 扩增条件的优化 |
| 3.3.6 CSFV NS3 基因半定量 RT-PCR 检测 |
| 3.3.7 CSFV 病毒粒子的ELISA 检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 猪瘟病毒强弱毒株RT-PCR 快速鉴别检测方法研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 毒株、质粒和细胞 |
| 4.1.2 主要试剂和酶 |
| 4.1.3 临床待检样品 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.1.5 引物设计与合成 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 病毒RNA 的提取和cDNA 合成 |
| 4.2.2 PCR |
| 4.2.3 特异性试验与PCR 产物鉴定 |
| 4.2.4 临床样品的检测 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 RT-PCR 扩增CSFV 反应条件的确定 |
| 4.3.2 RT-PCR 对CSFV 强弱毒株的扩增 |
| 4.3.3 PCR 产物鉴定 |
| 4.3.4 对其他猪源病毒和疑似猪瘟病料的检测 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 猪瘟病毒E2 基因“自杀性”DNA 疫苗的构建及动物免疫试验 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 毒株、质粒与细胞株 |
| 5.1.2 主要试剂和工具酶 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 实验动物 |
| 5.1.5 引物设计和PCR 扩增 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 CSFV Shimen 株E2 基因的克隆与鉴定 |
| 5.2.2 重组自杀性DNA 疫苗表达载体的构建 |
| 5.2.3 重组质粒的细胞转染与E2 蛋白体外表达 |
| 5.2.4 重组质粒免疫小鼠T 细胞增殖检测 |
| 5.2.5 本动物免疫及抗体测定 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 猪瘟病毒Shimen 株E2 基因的克隆及鉴定 |
| 5.3.2 以表达引物的PCR 扩增 |
| 5.3.3 E2 基因重组表达质粒的鉴定 |
| 5.3.4 重组表达质粒体外转染的检测 |
| 5.3.5 免疫小鼠T 细胞增殖检测 |
| 5.3.6 免疫猪特异性抗体的检测 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 表达CSFV Shimen 株E0 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 毒株、菌株和质粒 |
| 6.1.2 主要试剂和工具酶 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.1.4 鸡胚和试验动物 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 引物设计与合成 |
| 6.2.2 含CSFV E0 和E2 基因的鸡痘病毒转移载体的构建 |
| 6.2.3 重组病毒的获得与纯化 |
| 6.2.4 重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 的鉴定 |
| 6.2.5 重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 诱导小鼠的免疫应答 |
| 6.2.6 重组鸡痘病毒对试验猪的免疫保护试验 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 CSFV E0、E2 基因的扩增 |
| 6.3.2 含CSFV E0-E2 基因的鸡痘病毒转移载体的鉴定 |
| 6.3.3 重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 的筛选与纯化 |
| 6.3.4 重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 的PCR 鉴定 |
| 6.3.5 FV282-E0-E2 免疫小鼠抗猪瘟血清抗体的检测 |
| 6.3.6 免疫试验猪的结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、禽用重组鸡痘病毒活载体疫苗研究及其应用（论文参考文献）
- [1]鸡新城疫病毒增殖培养细胞系的筛选与稳定表达唾液酸转移酶（ST6Gal）细胞株的构建及其应用[D]. 董炳梅. 吉林大学, 2019
- [2]动物病毒重组活载体疫苗研究进展[J]. 谢青梅,封柯宇,沈勇. 华南农业大学学报, 2019(05)
- [3]高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的制备[D]. 李丹丹. 吉林大学, 2016(09)
- [4]H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状及应用前景[J]. 冯书营,董仕桢,张树逍. 中国畜牧兽医, 2013(09)
- [5]鸡痘病毒282E4株基因组和蛋白质组解析、载体构建与HIV重组疫苗研究[D]. 刘存霞. 吉林大学, 2013(11)
- [6]禽流感基因重组活载体疫苗和表位疫苗的研究进展[J]. 张文慧,钱爱东. 中国兽医科学, 2011(10)
- [7]鸡新城疫基因工程疫苗的研究进展[J]. 左颖,孙德君,郑德福,姜丽萍. 黑龙江畜牧兽医, 2011(11)
- [8]Asia 1型、O型FMDV复合多表位口服疫苗构建与实验免疫研究[D]. 胡博. 吉林大学, 2010(05)
- [9]禽用基因工程疫苗的研究和应用进展[J]. 吴俊铭,叶喜永,李强. 畜牧兽医科技信息, 2010(10)
- [10]猪瘟病毒的shRNA干扰、强弱毒鉴别及基因工程疫苗研究[D]. 郭抗抗. 西北农林科技大学, 2010(10)