一、锰对大鼠海马神经微丝蛋白表达的影响（论文文献综述）
杨帆[1]（2020）在《海马miR-181c在CCI大鼠神经痛中的作用及其表达调控机制的初步研究》文中提出疼痛是与实际或潜在的组织损伤相关的一种不愉快的感觉和情感体验。近年研究表明,海马参与了外周神经损伤后的痛觉感受。微小RNA（microRNA）是真核生物中的一种非编码RNA,可以通过靶向特定mRNA进行降解或抑制翻译来调节基因表达。近年研究表明,miR-181c表达于海马组织,给予外源性miR-181c可以减轻海马神经元凋亡,其机制可能是由于抑制TLR4（Toll like receptor 4,Toll样受体4）信号通路活化导致IL-1β（Interleukin-1 beta,白介素1β）和TNF-α（Tumor necrosis factor-alpha,肿瘤坏死因子-α）表达下降。此外,mRNA芯片技术结合双荧光素酶报告基因载体技术证明,TNF-α和TLR4是miR-181c的直接下游靶点。近年研究表明,海马TNF-α和TLR4表达上调参与了疼痛感受以及痛情绪的产生等。由此,初步推测:海马补充miR-181c有可能通过下调TLR4及TNF-α表达来缓解CCI（Chronic constriction injury of sciatic nerve,坐骨神经慢性压缩性损伤）大鼠神经痛。本研究将从疼痛的神经化学层面探讨海马miR-181c在CCI大鼠神经痛中的作用及其表达调控机制。目的:1.阐明海马miR-181c是否通过下调TNF-α和TLR4表达,缓解CCI大鼠神经痛。2.阐明海马CA1区注射NF-κB活性抑制剂PDTC能否通过抑制NF-κB活化,上调转录因子CTCF表达,从而促进miR-181c生成,缓解CCI大鼠神经痛。方法:1.选用30只56周龄SD雄性大鼠,均行左侧CCI术,随机分成3组:假手术组（Sham组）、CCI3天组、CCI7天组。于术前1天,术后第1、3、5、7天测定TWL（Thermal withdrawal latency,热缩足潜伏期）;分别于第3、7天取海马,RT-qPCR检测miR-181c、TLR4和TNF-αmRNA表达,Western Blot（WB）检测TLR4和TNF-α蛋白的表达。2.选用54只56周龄SD雄性大鼠,双侧海马CA1区植入套管,随机分6组:Sham组、CCI+vehicle（生理盐水）组、CCI+激动剂阴性对照组（CCI+miR-181c agomir NC）、CCI+抑制剂阴性对照组（CCI+miR-181c antagomir NC）、CCI+激动剂组（CCI+miR-181c agomir）、CCI+抑制剂组（CCI+miR-181c antagomir）。在CCI术后第1-7天,sham组及CCI+vehicle组海马注射生理盐水0.5μL（2次/日）。CCI+agomir/antagomir阴性对照组注射各自的阴性对照（20 nM,0.5μL,2次/日）。CCI+miR-181c激动剂/抑制剂组注射miR-181c agomir或miR-181c antagomir（20 nM,0.5μL,2次/日）。在术前1天,术后第1、3、5、7天测定给药1 h后的TWL;在第7天取海马,RT-qPCR检测miR-181c、TNF-α和TLR4 mRNA的表达;WB检测CTCF、Nrf2、TLR4及TNF-α蛋白表达。3.选用40只56周龄SD雄性大鼠,双侧海马CA1区植入套管,随机分4组:Sham组、Sham+PDTC、CCI+vehicle（生理盐水）、CCI+PDTC组。CCI+PDTC组大鼠双侧海马持续7天注射PDTC（0.5μg/μL,2次/日）。Sham和CCI+vehicle组注射等体积的生理盐水。于术前1天,术后第1、3、5、7天测定给药1 h后的TWL;在第7天取海马,RT-qPCR检测miR-181c表达;WB检测CTCF、NF-κB p65及NF-κB p50蛋白表达。结果:1.热痛阈结果显示,与sham组相比,CCI组术后TWL明显下降。RT-qPCR和WB结果显示,与sham组相比,CCI组海马TLR4和TNF-α的mRNA及蛋白表达在损伤后第3天开始上升,在第7天上升更明显。与sham组相比,CCI组海马miR-181c表达于术后第3天下降,第7天下降更为显着。2.与CCI组相比,海马注射miR-181c agomir后,神经损伤大鼠的TWL明显升高。与CCI组相比,海马注射miR-181c antagomir的神经损伤大鼠TWL下降。RT-qPCR和WB结果显示,与Sham组比较,CCI组海马TLR4和TNF-αmRNA及蛋白表达显着升高,miR-181c表达显着下降。与CCI组相比,miR-181c agomir处理组海马TLR4和TNF-αmRNA及蛋白表达显着下降,miR-181c表达显着上升。与CCI组相比,注射miR-181c antagomir之后,神经损伤大鼠TLR4和TNF-α蛋白及mRNA表达上升更为明显,miR-181c表达下降更为明显。与Sham组相比,CCI组海马组织胞浆和胞核CTCF表达明显下降,胞浆Nrf2表达明显下降而胞核Nrf2表达明显升高。与CCI组相比,CA1区注射miR-181c agomir后神经损伤大鼠海马组织胞浆、胞核CTCF表达明显升高,但胞核Nrf2表达明显降低,胞浆Nrf2有所上升。与CCI组相比,CA1区注射miR-181c antagomir后,神经损伤大鼠海马CTCF和Nrf2在胞浆、胞核的表达均无明显变化。注射miR-181c agomir或antagomir阴性对照不影响CCI大鼠TWL变化,不影响海马TLR4、TNF-α、CTCF和Nrf2表达。3.与CCI组相比,海马注射PDTC后,神经损伤大鼠TWL明显升高。RT-qPCR结果显示,与Sham组比较,CCI组海马miR-181c表达显着下降。与CCI组相比,PDTC注射治疗组海马miR-181c表达显着上升。与Sham组相比,CCI组海马胞浆CTCF、NF-κB p50和p65表达明显下调,胞核NF-κB p50和p65表达明显上调,胞核CTCF表达明显下调。与CCI组相比,CA1区注射PDTC后,神经损伤大鼠海马CTCF、NF-κB p50和p65在胞浆的表达明显上调,胞核NF-κB p50和p65表达明显下调,但胞核CTCF表达明显上调。结论:1.海马注射miR-181c激动剂可以明显减轻CCI大鼠热痛觉过敏,抑制CCI引起的TLR4和TNF-α表达增加。2.海马注射PDTC通过抑制NF-κB活化,上调转录因子CTCF表达,从而促进miR-181c生成,缓解CCI大鼠神经痛。
何瑞阳[2]（2020）在《低频电针对SAMP8小鼠海马Tau蛋白磷酸化及微管相关蛋白MAP2的影响研究》文中研究说明目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）,是一种以典型记忆丧失和学习困难为主要特征的神经退行性疾病。其临床上主要表现为进行性记忆认知障碍、行为异常以及人格行为的改变。近年来,有关AD的研究众多,但其发病机制阐述尚不完全。本实验通过低频电针AD模型小鼠“百会”、“肾俞”穴,观察电针对AD小鼠学习记忆能力的改善情况,并探讨其潜在的中枢机制,为临床电针防治AD提供一定的科学依据。方法:实验采用随机数字法将24只5月龄SAMP8小鼠分为模型组、电针组、假电针组,每组8只;同龄8只SAMR1小鼠作为对照组。电针组采用低频电针治疗,穴位定位参照中国针灸学会实验针灸分会指定的《常用实验动物穴位定位图谱》,选取百会及双侧肾俞穴。百会穴向前斜刺2mm,肾俞向内侧斜刺34mm,其中电针的正负极分别接于百会、肾俞（肾俞穴采用双侧交替进行刺激）。进针后连接G6805II型电针仪,选取连续波,频率2Hz,留针20min。每天1次,6d为一个疗程,每个疗程结束后休息一天,共5个疗程。假电针组取与电针组相同的穴位,仅针刺至皮下,接电针连线但不予通电。模型组、对照组不进行任何针刺治疗,只在相同环境下抓取固定及饲养。治疗结束后,通过Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力变化,免疫组化法检测海马PFH-1表达,Western blotting检测小鼠海马MAP2、Tau-1、总Tau蛋白的表达变化,透射电镜观察小鼠海马区轴突超微结构的变化。结果:1水迷宫检测显示:在定位航行实验中,对照组小鼠逃避潜伏期明显短于模型组、假电针组、电针组;第1d假电针组与模型组相比较没有显着差异,从第2d开始假电针组比模型组小鼠逃避潜伏期均缩短;模型组与电针组比较逃避潜伏期明显延长;电针组改善小鼠学习记忆能力明显优于假电针组。空间探索实验中:对照组小鼠跨越平台次数明显多于模型组、假电针组、电针组;与模型组相比较,电针组、假电针组小鼠经过目标象限虚构平台次数明显增加,但电针组明显多于假电针组。2小鼠海马区轴突超微结构的变化:透射电镜显示,对照组、电针组微管微丝结构未见明显异常;模型组、假电针组微管及神经微丝排列紊乱,甚至出现神经微管及微丝解聚、断裂等轴突变性现象。3免疫组化显示:模型组小鼠海马神经细胞胞浆中可见大量棕色PHF1（Ser396/404）蛋白,电针组PHF1阳性细胞数明显少于假电针组及模型组;与模型组相比,假电针组PHF1阳性细胞数无显着差异;对照组PHF1阳性细胞数明显少于电针组、假电针组。电针组小鼠海马齿状回PHF1阳性细胞数明显少于模型组及假电针组。4各组小鼠海马MAP2、Tau-1、总Tau蛋白的表达变化:对照组小鼠海马MAP2蛋白表达量明显高于模型组、电针组、假电针组,与模型组、假电针组相比,电针组MAP2蛋白表达量明显增高,而与模型组相比,假电针组MAP2蛋白表达无显着性差异。对照组小鼠海马tau-1/总tau蛋白明显高于模型组、电针组、假电针组,模型组与假电针组比较tau-1/总tau蛋白相对表达量无明显差异;与模型组、假电针组相比,电针组小鼠海马tau-1/总tau蛋白相对表达量显着降低。结论:1低频电针能够明显改善AD小鼠的学习记忆能力。2低频电针改善AD小鼠学习记忆能力,可能与提高海马MAP2蛋白表达,降低Tau蛋白的磷酸化,维持轴突稳定有关。
李家宇[3]（2020）在《抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎脑脊液神经微丝蛋白研究》文中进行了进一步梳理目的:神经微丝蛋白（Nf）是高度特异性的神经元支架蛋白,含有神经丝轻链（Nf-L）、中链（Nf-M）和重链（Nf-H）三个亚基。在神经退行性变或神经元细胞死亡的条件下,Nf发生破坏,其组成的亚基随后被释放,导致脑脊液或血清中的亚基蛋白含量升高。它们被认为是神经损伤的潜在标志物。Nf浓度在视神经脊髓炎、多发性硬化、阿尔茨海默病等神经系统疾病中明显增加。然而,抗NMDA受体脑炎患者脑脊液中Nf是否升高,是否参与疾病发病过程仍不清楚。患者脑脊液Nf水平是否可作为衡量急性期疾病严重程度及评估疾病预后的客观有效指标有待探究。此外,抗NMDA受体脑炎的临床症状复杂,尤其是在儿童患者中,许多临床医生不能及时将其与病毒性脑炎或心理疾病等其他疾病区分开来,因而寻求该疾病的有效生物标记物尤为重要。我们拟对急性期抗NMDA受体脑炎患者（NMDA组）、病毒性脑膜脑炎/脑炎患者（VM组）和非炎症性疾病对照组患者（NC组）脑脊液中的Nf水平进行检测,分析这三组患者当中脑脊液的Nf水平是否存在差异以及抗NMDA受体脑炎患者接受治疗前后脑脊液Nf的水平是否发生变化。并进一步分析脑脊液中Nf的水平是否与炎症因子或疾病临床评估指标改良Rankin量表评分（mRS评分）存在相关性,从而判断其是否可作为抗NMDA受体脑炎客观有效的生物标志物以评估疾病急性期的严重程度及预后,并为该疾病与病毒性脑炎的鉴别提供更多的依据。方法:我们从南方医科大学南方医院收集了抗NMDA受体脑炎患者、病毒性脑膜脑炎/脑炎患者和非炎症性疾病对照组患者的临床资料及患者脑脊液检测抗NMDA受体抗体的结果。根据疾病诊断标准、入组排除标准以及有无可用的冻存脑脊液,最终纳入抗NMDA受体脑炎患者24例（其中参与随访并再次留取脑脊液患者9例）,病毒性脑膜脑炎/脑炎患者1 1例,对照组患者21例（明确排除前两种疾病的非炎症性疾病患者）。分别使用酶联免疫吸附试验（ELISA）对三组患者脑脊液中的神经微丝蛋白（Nf-L、pNf-H）和细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-17A）的水平进行检测,并对纳入随访组的9位抗NMDA受体脑炎患者重复同样的检测和评估。患者的临床结果或预后的评估依据mRS评分量表进行。使用SPSS软件对所有数据结果进行统计学分析,Graphpad作统计图。结果:分析患者急性期数据显示,与非炎症性疾病对照组患者相比,抗NMDA受体脑炎患者脑脊液神经微丝蛋白Nf-L（P<0.0001）和Nf-H（P=0.004）水平及细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-17A,P值均小于0.05）的水平均显着升高。而与病毒性脑膜脑炎/脑炎患者相比,急性期抗NMDA受体脑炎患者仅Nf-L（P<0.0001）升高。此外,抗NMDA受体脑炎患者急性期脑脊液Nf-L浓度与细胞因子（IL-1β,IL-17A）水平及临床mRS评分均呈正相关。分析抗NMDA受体脑炎随访患者资料显示,治疗后患者脑脊液Nf-L、Nf-H、IL-1β、IL-6、IL-17A水平均下降（P<0.05）。患者随访期间神经微丝蛋白水平（Nf-L）与临床mRS评分仍然表现出正相关关系,神经微丝蛋百Nf-L水平下降程度与临床mRS评分下降幅度也存在正相关关系。结论:抗NMDA受体脑炎患者急性期脑脊液中Nf-L水平升高,并与患者临床结果和预后呈正相关关系,是抗NMDA受体脑炎新的生物标记物。Nf-L可客观有效地评估患者急性期疾病严重程度和疾病预后,并为该疾病与病毒性脑炎进行鉴别提供了更多的依据。患者急性期Nf-L水平越高可能提示当前疾病越严重,为临床医师及时监测疾病动态提供了可量化的生物指标。此外,神经元损伤可能参与了抗NMDA受体脑炎发病过程,具体作用机制还有待进一步研究。
温平镜[4]（2019）在《PAS-Na对ERS-Txnip/Nlrp3炎症通路介导锰神经毒性的干预研究》文中认为目的锰（Mn）是人体必需微量元素,参与身体各种重要的生理过程。但长期过量锰暴露会引起锰中毒,损害椎体外系和学习记忆力。海马是主导学习记忆的主要脑区,也是锰中毒累及的主要脑区之一。据研究,锰暴露激活小鼠海马小胶质细胞,NOD样受体蛋白3（Nlrp3）炎性体表达增高,炎症反应增强。细胞内质网应激（ERS）可促进细胞氧化应激,进而诱导硫氧还蛋白互作蛋白（Txnip）高表达,并激活Nlrp3炎症小体。对氨基水杨酸钠（PAS-Na）属于非甾体抗炎药,具有抗炎、抗氧化作用,可抑制小胶质细胞的活化和炎症反应,且本团队此前研究发现PAS-Na治疗对锰中毒患者疗效较好。因此,本研究拟通过体内外实验探讨PAS-Na对ERS-Txnip/Nlrp3炎症小体信号通路介导锰神经毒性的干预作用机制。方法1体外研究:体外试验选大鼠小胶质细胞系-HAPI细胞为研究对象。（1）首先用噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度锰、PAS-Na暴露24h后的HAPI细胞存活率;（2）药物试验分组及处理如下:①锰损伤模型:分为对照、低、中、高锰组,分别给予0、50、100、200 μmol/L（μM）Mn暴露;②PAS-Na干预组:分为对照组、染锰组、低、中、高PAS-Na组（L-、M-、H-PAS-Na组）及PAS-Na组,分别给予完全培养基、Mn 200 μM、Mn 200 μM+PAS-Na 100、Mn 200μM+PAS-Na 200、Mn 200 μM+PAS-Na 400 μM及PAS-Na 400 μM;③牛磺熊脱氧胆酸（TUDCA）抑制组:对照组、染锰组、二甲基亚砜组（DMSO组）、TUDCA组、TUDCA抑制组,分别给予完全培养基、Mn 200μM、DMSO、TUDCA 100 μM、TUDCA 100+Mn 200μM暴露;④白藜芦醇（Resveratrol）抑制组:对照组、染锰组、DMSO组、Resveratrol组、Resveratrol抑制组分别给予完全培养基、Mn 200μM、DMSO、Resveratrol 20 μM、Resveratrol 20+Mn 200 μM 暴露;（3）用活性氧族（ROS）试剂盒检测锰损伤模型组、PAS-Na干预组及TUDCA抑制组的ROS生成水平;（4）蛋白免疫印迹法（WB）检测淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2x蛋白（Bax）、Nlrp3、Caspase-1、Txnip、（肌醇酶-1）IRE1蛋白表达;（5）酶联免疫吸附试验（Elisa）检测丙二醛（MDA）、蛋白质羰基（PCO）、白细胞介素（IL）-18、IL-1β、Txnip;（6）实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测:Bcl-2、Bax、Nlrp3、Caspase-1、Txnip、IRE1、IL-18、IL-1β信使核糖核酸（mRNA）表达。2体内试验:（1）动物分组:①锰中毒模型:48只SD大鼠按体重随机分为对照组、低、中、高锰组,每组12只,锰（MnC12.4H20）剂量分别为5、10、20mg/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水,1次/天×5天/周×8周;②PAS-Na治疗模型:72只SD大鼠按体重随机分为6组,每组12只,分别为对照组、染锰组、L-、M-、H-PAS-Na组及PAS-Na组。首先对照组和PAS-Na组均腹腔注射灭菌生理盐水,染锰组、L-、M-、H-PAS-Na组均腹腔注射Mn C12·4H20,剂量为20 mg/kg,1次/天×5天/周×8周。接着对照组和染锰组腹腔注射生理盐水,L-、M-、H-PAS-Na组及PAS-Na组分别背部皮下注射 PAS-Na 100、200、300、300 mg/kg,1 次/天 × 5 天/周 × 6 周。（2）观察指标:①每天观察动物症状、记录并称重;②学习记忆能力检测:每组选9只大鼠进行Morris水迷宫实验;③实验结束,收集血样,分离脑组织及其他脏器并称重计算脏器系数;④用石墨炉原子吸收光谱法和电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分别检测血锰和海马锰浓度。⑤透射电镜观察海马神经元超微结构改变;⑥免疫组化法检测Bax、Bcl-2阳性细胞表达。WB、PCR、Elisa检测指标与体外试验一致。结果1体外研究:（1）PAS-Na及锰对HAPI细胞存活率的影响:染锰200、300、400 μM使HAPI细胞存活率分别下降至86.6%、73.6%、57.4%（P<0.01或0.05）。100、200、300、400、600μM PAS-Na 暴露 24h 对 HAPI 细胞存活率无影响（P>0.05）。（2）PAS-Na对染锰HAPI细胞凋亡相关基因表达的影响:与对照组比较,高锰组Bax mRNA和蛋白表达升高（P<0.01）,中、高锰组Bcl-2 mRNA亦升高（P<0.05）。在PAS-Na干预试验中,染锰组Bax mRNA及蛋白表达均升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达均降低（P<0.01或0.05）;与染锰组比较,各浓度PAS-Na干预组Bax表达降低,Bcl-2表达升高,提示PAS-Na对Bax和Bcl-2基因的异常表达有拮抗作用（P<0.01或0.05）。（3）PAS-Na对染锰HAPI细胞炎症反应的影响:与对照组比较,染锰使Nlrp3 mRNA和蛋白、Caspase-1蛋白表达升高（P<0.01）。IL-18含量、IL-1β mRNA及含量亦升高（P<0.01 或0.05）。经PAS-Na干预后,Nlrp3 mRNA和蛋白、Caspase-1蛋白、IL-1β mRNA低于染锰组（P<0.01或0.05）。（4）PAS-Na对染锰HAPI细胞氧化应激的影响:HAPI细胞ROS水平随着染锰剂量增加而升高。高锰组MDA含量亦高于对照组（P<0.05）。染锰组ROS阳性细胞明显增多,L-、M-、H-PAS-Na干预均可拮抗这种效应。（5）PAS-Na对染锰HAPI细胞Txnip表达的影响:高锰组Txnip蛋白相对表达量和蛋白浓度升高（P<0.01或0.05）。L-、M-、H-PAS-Na组Txnip蛋白相对表量低于染锰组（P<0.01或0.05）。（6）PAS-Na对染锰HAPI细胞IRE1表达的干预作用:高锰组IRE1 mRNA和蛋白表达高于对照组（P<0.01）。H-PAS-Na治疗组IRE1 mRNA和蛋白表达低于染锰组（P<0.01）。（7）TUDCA对Txnip/Nlrp3信号通路的抑制作用:与染锰组比较,TUDCA抑制组ROS生成水平下降,IRE1 mRNA及蛋白、Txnip蛋白相对表达量和蛋白浓度、Caspase-1 mRNA、IL-1β mRNA及含量均有不同程度降低（P<0.01 或 0.05）。（8）Resveratrol对Txnip/Nlrp3信号通路的抑制作用:与染锰组比较,Resveratrol 抑制组 Txnip mRNA 及蛋白、Nlrp3 mRNA 及蛋白、Caspase-1 和IL-1β mRNA均有不同程度降低CP<0.01或0.05)。2.体内研究:（1）PAS-Na对染锰大鼠生长发育的影响:8周染锰大鼠出现腹泻、食欲不振、易激惹现象,大鼠体重随染锰剂量增加而减轻（P<0.05或0.01）,高锰组肝、肾系数明显高于对照组。经6周PAS-Na治疗后,大鼠中毒症状消失,各组大鼠体重及肝、肾系数亦未见明显差异。（2）PAS-Na对染锰大鼠血、海马锰含量的影响:8周染锰大鼠血锰浓度随染锰剂量增加而升高（P<0.01）。低、中、高染锰组海马锰浓度都高于对照组（P<0.01）。而L-、M-、H-PAS-Na组血、脑锰随PAS-Na治疗剂量增加而降低（P<0.01或0.05）。（3）PAS-Na对染锰大鼠学习记忆的影响:Morris水迷宫试验第三至第五天高锰组大鼠游泳路程和逃避潜伏期均大于对照组（P<0.01或0.05）。高锰组大鼠平台穿越次数显着下降（P<0.05）。经6周PAS-Na治疗后,各组动物游泳路程、逃避潜伏期均有所恢复,并接近至对照组水平,其平台穿越次数亦无差异。（4）PAS-Na对染锰大鼠海马损伤的干预作用:锰暴露使海马Bax阳性细胞增多,且BaxmRNA和蛋白表达亦升高（P<0.01或0.05）,高锰组Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于对照组（P<0.01）,中、高锰组海马神经元均出现不同程度变性。经6周PAS-Na治疗后,染锰组仍见较多Bax阳性细胞,各PAS-Na治疗组只见少量Bax阳性细胞。染锰组Bax mRNA及蛋白表达均升高,Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01或0.05）,PAS-Na治疗对染锰组Bax和Bcl-2异常表达有拮抗作用。染锰组神经元仍有轻微变性,PAS-Na治疗组海马神经元均恢复正常。（5）PAS-Na对染锰大鼠海马炎症反应的影响:高锰组Nlrp3 mRNA及蛋白表达高于对照组和低、中锰组（P<0.01）,中、高锰组Caspase-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.01或0.05）。中锰组IL-18 mRNA及含量和中、高锰组 IL-1β mRNA 高于对照组（P<0.01 或 0.05）。H-PAS-Na 组 Nlrp3 mRNA和Caspase-1蛋白表达低于染锰组,M-、H-PAS-Na组IL-18 mRNA及含量、IL-1β mRNA及含量亦下降（P<0.01）。（6）PAS-Na对染锰大鼠海马氧化应激的影响:与对照组比较,高锰组 MDA、PCO 均升高（P<0.01或 0.05）。H-PAS-Na 组 MDA 和 PCO 含量均低于染锰组（均P<0.05）。（7）PAS-Na对染锰大鼠海马Txnip表达的影响:高锰组Txnip蛋白相对表达量和蛋白含量高于对照组（P<0.01或0.05）。H-PAS-Na组Txnip mRNA和蛋白表达低于染锰组（均P<0.01）。（8）PAS-Na对染锰大鼠海马IRE1表达的影响:中、高锰组IRE1 mRNA和蛋白表达高于对照组（P<0.01或0.05）。H-PAS-Na组IRE1mRNA和蛋白表达低于染锰组（均P<0.01）。结论（1）染锰可影响大鼠生长发育,导致其体重减轻,肝、肾系数增高,PAS-Na对锰中毒大鼠生长发育有一定干预作用。（2）染锰使大鼠血、海马锰浓度升高,损害海马进而影响学习记忆能力。PAS-Na具有促排锰作用,可缓解海马损伤。（3）染锰可能诱导了 HAPI细胞和海马小胶质细胞ERS,引起细胞氧化损伤,激活Txnip/Nlrp3信号通路介导炎症反应,使神经细胞损伤。PAS-Na治疗可抑制ERS-Txnip/N1rp3炎症小体信号通路激活,使锰中毒炎症反应减轻。
罗海龙,贾茜,姜爱英,郭艳芹,董妍,毕鹏翔[5]（2017）在《N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型泛连接蛋白-1表达的影响》文中研究指明目的观察N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型神经元细胞活力,凋亡及泛连接蛋白（Panx）-1表达的影响。方法取SD新生乳鼠双侧海马,体外培养海马神经元至第9天,经鉴定的海马神经元随机分为正常对照组、模型组和MK-801（地卓西平,NMDA受体拮抗剂）组。正常对照组为正常细胞的细胞培养液培养3 h后恢复维持培养液;模型组为无镁细胞外液培养3 h后恢复维持培养液;MK-801组加入含10μmol/L MK-801维持培养液预保护30 min,更换为无镁细胞培养液培养3 h后恢复维持培养液。模型建立24 h后,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测神经元细胞活力,分别采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法（TUNEL）法和流式细胞仪膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染法检测神经元凋亡,采用蛋白质印迹法（Western印迹）检测神经元Panx-1表达,采用实时荧光定量PCR（Real Time-PCR）检测神经元Panx-1 mRNA表达。结果与模型组比较,MK-801组神经元细胞活力显着升高（P<0.05）,神经元凋亡指数和凋亡率、Panx-1表达、Panx-1 mRNA表达显着降低（P<0.05）。结论 NMDA受体阻断可抑制大鼠海马神经元癫痫样放电模型神经元损伤,发挥神经元保护作用,并抑制神经元Panx-1表达。
李少军[6]（2017）在《PAS-Na对染锰大鼠脑炎症反应的影响》文中认为【目的】锰是人体必需微量元素,但长期过量锰暴露可引起锰中毒。锰中毒不仅损伤锥体外系,而且累及脑的其他部位包括皮层、海马和丘脑。炎症是神经退行性疾病的一个重要过程,且MAPK信号通路可能是锰神经毒性的主要靶通路。体内外研究显示,非甾体抗炎药通过抑制炎症反应和小胶质细胞活性来干预多巴胺能神经元的进行性退化,具有保护神经作用。对氨基水杨酸钠（PAS-Na）是一种非甾体抗炎类药物,我室率先应用PAS-Na治疗锰中毒病人效果较好。本研究拟通过体内毒理学试验,采用石墨炉原子吸收光谱法、免疫组化、酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）、Real-Time PCR和Western Blot等技术从MAPK信号通路探讨锰致大鼠皮层、海马和丘脑炎症反应及PAS-Na的干预机制。【方法】动物分组及处理:SPF级雄性成年SD大鼠适应性喂养1周后,（1）短期重复实验:SPF级雄性SD大鼠40只,体重（184.5±10.7）g,随机分为染锰组和正常对照组（对照组）,每组20只。染锰组腹腔注射（ip）15 mg Mn Cl2/kg,对照组ip等容量生理盐水,每日1次,每周5天,连续4周。（2）亚慢性实验:SD雄性大鼠,体重（80±20）g,随机分为对照、高剂量PAS-Na对照组（PAS对照）、染锰、PAS-Na预防性干预（PAS预防）组和低、中、高剂量PAS-Na（L-、M-、H-PAS）治疗组,观察期为8、12、18周。染锰、PAS预防及各剂量PAS-Na治疗组ip 15 mg Mn Cl2/kg,对照组和观察期18周的PAS对照组ip等容量生理盐水,每日1次,每周5天,连续8或12周;其中PAS预防组在染锰的同时,每天背部皮下注射（sc）240 mg PAS-Na/kg,每天一次,每周5天,连续8和12周;观察期8或12周的PAS对照组每天背部皮下sc 240 mg PAS-Na/kg,每天一次,每周5天,连续8或12周。然后,L-、M-、H-PAS治疗组及观察期18周的PAS对照组分别sc 80、160、240 mg、240 mg PAS-Na/kg,其余组背部sc等容量生理盐水,每日1次,每周4天停药3天,连续6周。使用的各剂量PAS-Na溶液的PH约为6.7左右;Mn Cl2 PH为5.5至5.7左右。实验指标测定:（1）生长发育指标检测:每周日称动物体重1次;实验结束时,处死动物,取软组织脏器包括心、脾、肝、肺、睾丸、肾等脏器,并称重,计算其脏器系数比;（2）空间学习记忆能力检测:实验结束前1周,每组随机抽取10只动物进行Morris水迷宫实验以测试其学习记忆能力改变;（3）石墨炉原子吸收光谱法测定全血锰和脑锰（丘脑、海马和皮层）含量;（4）免疫组化检测皮层、海马和丘脑胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、bax、bcl-2、caspese3阳性细胞表达;（5）炎症因子改变检测:酶联免疫吸附测定法检测皮层、海马和丘脑TNF-α、IL-1β、IL-6和PGE2炎症因子含量;实时荧光定量PCR（RT-PCR）法测定TNF-α、IL-1β、IL-6和COX-2 m RNA表达量;（6）蛋白免疫印迹法（WB）测定MAPK通路的T-/p-JNK、ERK、p38及COX-2蛋白表达。【结果】（1）PAS-Na对染锰大鼠生长发育的影响:于染锰第三或第四周起,染锰组大鼠体重比对照组轻。亚慢性试验（观察期8和12周）:染锰第五和第六周,PAS预防组大鼠体重较染锰组重;PAS-Na单独作用第三周,PAS对照组大鼠体重比对照组轻（P<0.05）。亚慢性试验（观察期18周）治疗第五和第六周,M-和H-PAS组大鼠体重比染锰组重（P<0.05）;其中PAS对照组于第三周的体重比对照组轻（P<0.05）;除了上述时间外,PAS预防或PAS治疗均对染锰大鼠体重无显着性作用。（2）PAS-Na对染锰大鼠脏器系数的影响:观察期4周,染锰组大鼠脾脏和肾脏系数比对照组大（P<0.05）;与对照组比较,染锰组大鼠心脏、肝和睾丸系数无显着性变化（p>0.05）。观察期8周,与对照组相比,染锰组大鼠心、肝、脾和肾脏系数升高（P<0.05）;而PAS预防组脾脏系数比染锰组低（P<0.05）;PAS预防组大鼠心、肝和肾脏系数与染锰组比较无显着性差异（P>0.05）。观察期12周,染锰组心、肾脏、睾丸和肺系数比对照组低,PAS预防组的睾丸系数比染锰组高（P<0.05）;PAS预防组大鼠心和肾脏系数与染锰组比较无显着性变化（P>0.05）。观察期18周,与对照组比较,染锰组大鼠心脏和睾丸系数降低,肝脏系数升高（P<0.05或0.01）;与染锰组比较,H-PAS组大鼠心脏系数升高,肝脏系数减低,差异有统计学差异（P<0.05）。（3）PAS-Na对染锰大鼠空间学习记忆能力的影响:各组大鼠平均逃避潜伏期均随着测试天数的增加而减少。短期重复试验即观察期4周,染锰组大鼠在测试第1、4、5天的逃避潜伏期和游泳路程比对照组长（P<0.05或0.01）。观察期8周,染锰组大鼠在测试第1、3、4、5天的平均逃避潜伏期和游泳路程较对照组长（P<0.05或0.01）;而PAS预防组大鼠在测试第3、4、5天平均逃避潜伏期和游泳路程较染锰组短（P<0.01）。观察期12周,染锰组大鼠在测试第2、3、4、5天的平均逃避潜伏期和游泳路程较对照组长（P<0.05或0.01）;而PAS预防组大鼠在测试第4和5天平均逃避潜伏期和游泳路程较染锰组短（P<0.05或0.01）。观察期18周,染锰组大鼠在测试第3、4、5天的平均逃避潜伏期和游泳路程较对照组长（P<0.05或0.01）;而M-PAS和H-PAS组大鼠在测试第3、4和5天平均逃避潜伏期和游泳路程较染锰组短（P<0.05或0.01）。各时期的PAS-Na对照组的平均逃避潜伏期和游泳路程与对照组比较无显着性差异（P>0.05）。定位航行实验结束后第二天,进行空间探索实验。观察期4周,与对照组比较,染锰组大鼠平台象限时间百分和穿越平台次数降低（P<0.05）。观察期8周,染锰组大鼠平台象限路程百分比、时间百分比和穿越平台次数均比对照组低（P<0.05或0.01）;PAS预防组大鼠穿越平台次数比染锰组高（P<0.01）。观察期12周,染锰组大鼠平台象限路程百分比、时间百分比和穿越平台次数均比对照组低（P<0.01）;PAS预防组大鼠平台象限路程百分比、时间百分比和穿越平台次数均比染锰组高（P<0.05或0.01）。观察期18周,染锰组大鼠平台象限路程百分比、时间百分比和穿越平台次数均比对照组低（P<0.01）;M-和H-PAS组大鼠平台象限路程百分比、时间百分比和穿越平台次数比染锰组高（P<0.05或0.01）。各时期的PAS对照组大鼠的平台象限路程百分比、时间百分比和穿越平台次数与相应时期的对照组比较无显着性差异（P>0.05）。各时期,各组大鼠的游泳速度无显着性差异（P>0.05）。（4）PAS-Na对染锰大鼠血锰浓度和脑锰浓度的影响:短期重复实验中,染锰组大鼠血锰和丘脑锰含量比对照组高（P<0.05）;在亚慢性毒性实验中,观察期8、12和18周均发现染锰组大鼠血锰和脑锰（皮层、海马和丘脑）浓度均比对照组高。其中,脑锰浓度（皮层、海马和丘脑）随着染锰时间延长而有一定的时间反应关系。PAS预防或治疗组大鼠血锰和脑锰浓度（皮层、海马和丘脑）浓度均低于染锰组。（5）PAS-Na对染锰大鼠皮层、海马和丘脑GFAP阳性细胞的表达量的影响:短期重复实验（观察期4周）,染锰组大鼠丘脑GFAP阳性细胞表达量比对照组高（P<0.05）。亚慢性实验:观察期8周,染锰组大鼠丘脑GFAP阳性细胞表达量比对照组高（P<0.01）;与染锰组比较,PAS预防组大鼠丘脑GFAP阳性细胞表达量降低（P<0.01）。观察期12周,染锰组大鼠丘脑、海马和皮层GFAP阳性细胞表达量均比对照组高（P<0.01）;PAS-Na干预使染锰大鼠丘脑和皮层GFAP阳性细胞表达量降低（P<0.05）;而对染锰大鼠海马GFAP阳性细胞表达量无影响。观察期18周,与对照组相比,染锰组大鼠丘脑、海马和皮层GFAP阳性细胞表达量升高（P<0.01）;M-和H-PAS组大鼠丘脑GFAP、M-PAS组大鼠海马GFAP阳性细胞表达量比染锰组低（P<0.01）;PAS-Na治疗对锰致大鼠皮层GFAP阳性细胞表达量改变无显着性影响（P>0.05）。各时期的PAS对照组大鼠丘脑、海马和皮层GFAP阳性细胞表达量与对照组比较无显着性差异（P>0.05）。（6）PAS-Na对染锰大鼠皮层、海马和丘脑bax、bcl-2及caspese-3阳性细胞的表达量的影响:短期重复实验（观察期4周）,染锰组大鼠丘脑caspase-3阳性细胞表达量比对照组高,bcl-2阳性细胞表达量比对照组低（P<0.05）;与对照组比较,染锰组大鼠丘脑bax阳性细胞表达量无显着性变化,但bcl-2/bax比值比对照组低（P<0.05）。观察期8周,与对照组比较,染锰组大鼠丘脑caspase-3阳性细胞表达量升高,bcl-2阳性细胞表达量和bcl-2/bax比值降低（P<0.05）;与染锰组比较,PAS预防组大鼠丘脑caspase-3、bcl-2阳性细胞表达量和bcl-2/bax比值无明显差异（P>0.05）。观察期12周,染锰组大鼠丘脑、海马和皮层caspase-3及海马bax阳性细胞表达量比对照组高,bcl-2阳性细胞表达量和bcl-2/bax比值比对照组低（P<0.01）;但染锰对大鼠丘脑和皮层bax阳性细胞表达量无影响;PAS-Na干预使大鼠丘脑和海马caspase-3及海马bax阳性细胞表达量降低,大鼠丘脑和海马bcl-2阳性细胞表达量和bcl-2/bax比值升高（P<0.05或0.01）;但PAS-Na干预对染锰大鼠皮层caspase-3阳性细胞表达量、bcl-2阳性细胞表达量和bcl-2/bax比值无影响。观察期18周,与对照组相比,染锰组大鼠丘脑、海马和皮层caspase-3和bax阳性细胞表达量均升高,bcl-2和bcl-2/bax比值降低（P<0.01）;M-或H-PAS组大鼠丘脑caspase-3和bax阳性细胞表达量比染锰组低,bcl-2和bcl-2/bax比值比染锰组高,差异有统计学意义（P<0.05或0.01）;M-和H-PAS组大鼠海马caspase-3阳性细胞表达量比染锰组低（P<0.05或0.01）;PAS-Na治疗对锰致大鼠海马bcl-2、bax和bcl-2/bax比值改变无显着性影响。与染锰组比较,M-或H-PAS组大鼠皮层caspase-3和bax阳性细胞表达量比染锰组低,皮层bcl-2和bcl-2/bax比值升高（P<0.05或0.01）;PAS对照组大鼠皮层caspase-3阳性细胞表达量比对照组高（P<0.01,）。各时期的PAS对照组上述阳性细胞表达量与对照组比较无明显差异。（7）PAS-Na对染锰大鼠血清、皮层、海马和丘脑炎症因子含量的影响:观察期4周,染锰组大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α、丘脑IL-1β和PGE2含量比对照组高（P<0.05或0.01）;与对照组比较,染锰组血清PGE2、丘脑TNF-α和IL-6含量无显着性变化（P>0.05）。观察期8周,染锰组大鼠血清IL-6、IL-1β、PGE2及TNF-α、丘脑IL-1β和PGE2含量含量均比对照组高（P<0.05或0.01）;但染锰对丘脑TNF-α和IL-6含量无显着性变化（P>0.05）;与染锰组比较,PAS预防组大鼠血清IL-1β、TNF-α、丘脑IL-1β和PGE2含量降低（P<0.05）;PAS预防组大鼠血清IL-6和PGE2含量与染锰组无显着性差异（P>0.05）。观察期12周,染锰组大鼠血清、丘脑、海马及皮层IL-1β、IL-6、PGE2和TNF-α含量均比对照组高（P<0.05或0.01）;PAS-Na干预使血清IL-1β和TNF-α、丘脑IL-1β和PGE2、海马TNF-α和皮层IL-1β含量降低（P<0.01）。与染锰组比较,H-PAS组大鼠海马IL-6、IL-1β、PGE2和TNF-α含量降低（P<0.05或0.01）;染锰12周停止染锰6周,大鼠血清及各脑组织IL-6、IL-1β、PGE2和TNF-α含量仍比对照组高（P<0.05或0.01）;L-、M-和H-PAS组大鼠血清IL-1β和IL-6含量比染锰组低;与染锰组比较,M-PAS组大鼠丘脑IL-6含量和H-PAS组大鼠丘脑PGE2和TNF-α含量减低（P<0.05或0.01）;与染锰组比较,M-PAS组大鼠皮层IL-1β含量和H-PAS组大鼠皮层IL-6、TNF-α和PGE2含量降低（P<0.05或0.01）。各时期的PAS对照组大鼠血清和各脑组织炎症因子含量与对照组比较无显着性差异（P>0.05）。（8）PAS-Na对染锰大鼠丘脑IL-1β、IL-6、COX2和TNF-αm RNA表达的影响:染锰4周使大鼠丘脑IL-1β和COX-2 m RNA表达上调,其中以COX-2 m RNA表达变化最明显（P<0.05或0.01）;与对照组比较,染锰组大鼠丘脑IL-6和TNF-α表达升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。观察期8周,与对照组相比,染锰组大鼠丘脑IL-1β、COX-2和TNF-αm RNA表达升高（P<0.05或0.01）,而丘脑IL-6 m RNA无显着性变化（P>0.05）;与染锰组比较,PAS预防组大鼠丘脑IL-1β和COX-2 m RNA表达降低（P<0.05）,而丘脑TNF-αm RNA无显着性变化（P>0.05）。观察期12周,染锰组大鼠各脑组织（包括丘脑、海马和皮层）IL-6、IL-1β、COX-2和TNF-αm RNA表达均比对照组高（P<0.05或0.01）;与染锰组比较,PAS预防组大鼠丘脑TNF-α、COX-2、海马及皮层IL-6、IL-1β、TNF-αm RNA表达降低（P<0.05）,而丘脑IL-6、IL-1β、海马及皮层COX-2 m RNA无显着性变化（P>0.05）。观察期18周,染锰组大鼠皮层IL-6、IL-1β、TNF-α和COX-2m RNA表达仍比对照组高;染锰组大鼠丘脑IL-1β、PGE2、TNF-α、海马IL-6、IL-1β和TNF-αm RNA比对照组高（P<0.05或0.01）;高剂量PAS-Na治疗六周使上述锰引起上调的丘脑IL-1β、COX-2和TNF-αm RNA表达降低（P<0.05）;高剂量PAS-Na治疗六周使上述锰引起上调的海马IL-1β和IL-6 m RNA表达降低（P<0.05）;但PAS-Na治疗对锰引起海马TNF-αm RNA上调无明显作用。高剂量PAS-Na治疗六周使上述锰引起上调的皮层炎症因子m RNA表达降低（P<0.05或0.01）。各时期的PAS对照组大鼠各脑组织炎症因子m RNA表达与对照组比较无显着性差异（P>0.05）。（9）PAS-Na对染锰引起丘脑MAPK通路相关蛋白表达改变的影响:观察期4周,染锰组大鼠丘脑COX-2蛋白表达、p-ERK/T-ERK、p-P38/T-P38和p-JNK/T-JNK比值升高,即染锰促进丘脑p38、ERK和JNK的磷酸化。亚慢性毒性试验中,观察期8周均观察到染锰组丘脑COX-2蛋白表达、p-ERK/T-ERK、p-JNK/T-JNK和p-P38/T-P38比值均比对照组高（P<0.05或0.01）;与染锰组比较,PAS预防组JNK和p38的磷酸化降低（P<0.01）;但PAS-Na预防对锰致p38、EKR磷酸化和COX-2蛋白表达升高无明显作用。观察期12周,与对照组比较,染锰组大鼠丘脑COX-2、p-ERK、p-JNK、p-p38、海马COX-2、p-ERK、p-p38、皮层COX-2和p-ERK蛋白表达均升高（P<0.01）;与染锰组比较,PAS-Na预防组大鼠丘脑、海马和皮层COX-2表达降低（P<0.05）。染锰12周停止染锰6周,染锰大鼠丘脑COX-2、p-ERK、p-JNK、p-p38、海马COX-2、p-ERK、p-p38及皮层COX-2蛋白表达仍比对照组高（P<0.05或0.01）;PAS-Na治疗对上述蛋白表达均有一定的拮抗作用。各个时期的PAS对照组MAPK相关蛋白和COX-2蛋白表达量与对照组比较无显着性差异。【结论】（1）染锰引起大鼠体重增长缓慢、心、肾脏、脾、睾丸和肺系数改变,PAS-Na干预和治疗对染锰大鼠体重和脏器系数改变有一定程度的改善。PAS-Na对大鼠消化道有一定的影响,以至累及大鼠体重增长。（2）短期及亚慢性染锰都可影响大鼠学习能力,但其记忆功能改变仅出现在亚慢性锰暴露阶段。PAS-Na治疗或预防均可拮抗锰暴露所致的学习记忆功能改变。（3）染锰引起大鼠血锰和脑锰（皮层、海马和丘脑）浓度升高,其中脑锰浓度随着染锰时间延长而升高。PAS-Na干预和治疗均具有促排锰作用。（4）染锰可使大鼠皮层、海马和丘脑GFAP、Caspese-3阳性细胞的表达量升高,bcl-2阳性细胞表达量及bcl-2/bax比值降低;PAS-Na预防和/或治疗对锰引起皮层、海马和丘脑GFAP、Caspese-3阳性表达升高、bcl-2阳性细胞表达量及bcl-2/bax比值降低具有一定的拮抗作用。（5）染锰引起大鼠血清、皮层、海马和丘脑炎症因子含量升高及且相关的m RNA表达上调。PAS-Na预防和/或治疗对锰引起血清、皮层、海马和丘脑炎症反应具有一定的拮抗作用。（6）锰可能通过MAPK通路引起大鼠皮层、海马和丘脑炎症反应,其中以激活COX-2蛋白表达、ERK和p38磷酸化为主。PAS-Na预防和/或治疗可能通过MAPK通路拮抗锰引起的大鼠皮层、海马和丘脑炎症反应。
刘肖[7]（2016）在《工频磁场对阿尔茨海默病发生的影响及其机制研究》文中研究指明目的和意义研究发现一定条件的工频磁场（power frequency electromagnetic field,PF-MF）暴露对神经损伤修复存在积极作用。流行病学调查显示PF-MF与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）发生存在关联,但相关的动物实验极为罕见,且尚无合理机制能够解释这一关联。本研究将从整体、组织、细胞、蛋白水平了解PF-MF暴露对AD发生的影响,并通过分子生物学研究探讨其机制,藉此进一步阐明PF-MF神经生物学效应,并为AD的防治提供新思路。材料与方法（1）PF-MF暴露联合AD大鼠模型建立:二级雄性Wistar大鼠（200±20g）96只,随机分为:对照组（C）、PF-MF暴露组（MF）、AD模型组（AD）、PF-MF暴露联合AD模型组（AD+MF）。MF组和AD+MF组采用50Hz-400μT的PF-MF持续暴露60d,C组和AD组在伪暴露装置中饲养60d;AD组和AD+MF组动物在饲养期间第142d腹腔注射D-gal,第43d双侧海马立体定位微量注射方法Aβ25–35。C组和MF组动物以等体积生理盐水替代D-gal和Aβ25–35,其余处理同上所述。（2）于暴露终止后6h、7d、14d、28d,采用Morris水迷宫（Morris water mazz,MWM）检测检测动物学习记忆能力改变;采用光镜、电镜检测海马组织形态和超微结构改变;采用RIA方法检测海马及脑脊液AD标志物Tau、Aβ1-42表达改变。（3）于暴露终止后6h采用蛋白质组学方法检测海马蛋白表达谱改变,筛选PF-MF暴露差异敏感蛋白,并采用WB方法检测6h、7d、14d、28d大鼠海马PF-MF暴露差异敏感蛋白SNAP25、UCHL1、EFHD2、MBP表达改变（4）于暴露终止后6h、7d、14d、28d采用WB方法检测RKIP及NF-κB通路相关信号分子p-NF-κB、p-IKK、TAK1表达改变;采用Co-IP方法,检测RKIP/TAK1相互作用改变。（5）PF-MF暴露联合AD细胞模型建立:PC12细胞经NGF诱导分化后,随机分为:对照组（C）、PF-MF暴露组（MF）、AD模型组（AD）、PF-MF暴露联合AD模型组（AD+MF）。MF组和AD+MF组以50 Hz-100μT的PF-MF暴露24h,C组和AD组在伪暴露装置内培养24小时。期间在AD组及AD+MF组培养液中加入Aβ25-35。（6）于暴露终止后3h、6h、12h,采用光镜、电镜观察细胞形态结构改变;采用MTT法检测细胞增殖活力改变;采用AO/EB及流式细胞术检测细胞凋亡改变;采用Elisa方法检测凋亡通路相关因子Fas、TNFR1、Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase8、Caspase3表达改变。结果（1）大鼠体重改变:6h28d各组大鼠体重均呈增长趋势,但MF组及AD+MF组体重增长较C组及AD组显着延缓（P<0.01）。（2）大鼠学习记忆能力改变:6h28d各组大鼠平均逃避潜伏期（average escape latenc,AEL）均呈缩短趋势;其中,AD组较C组持续性延长（6h P<0.05、7d28d P<0.01）;MF组呈类似趋势,但其延长程度较AD组为轻,并于28d接近C组水平;但AD+MF组较AD组呈缩短趋势,并于28d具显着性差异（P<0.05）。（3）大鼠海马病理学改变:6h各实验组均可见海马神经元不同程度损伤病变:胞体变小、尼氏体含量减少、核形不整、染色质浓缩边集呈典型凋亡改变、线粒体及内质网空泡样变、突触双层膜结构模糊;AD及AD+MF组尚可见神经原纤维缠结及脂褐素沉积等AD典型病变,但AD+MF组病变较AD组轻微,病变神经元数量较之减少;28d,MF组病变基本恢复,AD组病变未见恢复,AD+MF组较AD组部分恢复。（4）大鼠脑脊液、海马AD标志物改变:6h28d,与C组比较,AD组大鼠脑脊液Aβ1-42含量均呈减少趋势,其中7d（P<0.01）、28d（P<0.05）具统计学差异;Tau含量则呈增高趋势,其中以6h（P<0.01）为显着;与AD组比较,AD+MF组脑脊液Aβ1-42含量呈增加趋势,其中以28d为显着（P<0.05）,Tau含量则呈降低趋势,其中7d具显着性（P<0.05）。（5）大鼠海马蛋白表达改变:2-DE银染色结果显示,PF-MF暴露可改变AD大鼠海马蛋白质表达谱,经PD-QUEST软件分析筛选并经MALDI-TOF-MS鉴定PF-MF暴露差异敏感蛋白15个,其功能涉及突触信号传递、氧化应激、蛋白降解与聚集、能量代谢、炎性反应、脑损伤。其中,差异蛋白SNAP25——7d和28d在AD+MF组较C组、AD组均显着增高（P<0.01）;UCH-L1——14d（P<0.05）及28d（P<0.01）在AD+MF组较C组和AD组均显着增高;EFHD2——6h在AD+MF组显着高于C组（P<0.05）和AD组（P<0.01）,7d在AD组显着低于对照（P<0.05）,28d在MF及AD+MF组均显着高于对照;MBP——7d在MF组较C组显着降低（P<0.01）,28d在MF组（P<0.01）和AD组（P<0.05）显着减少但AD+MF组表达显着高于AD组（P<0.01）。（6）大鼠海马RKIP及NF-κB通路相关信号分子表达检测:RKIP——6h28d在AD组表达呈增加-减少-恢复的改变,但AD+MF组表达在14d显着高于AD组（P<0.05）;TAK1——6h在MF组表达显着减少;14d各组表达均较对照显着减少。P-IKK——6h在MF组表达显着增高,7d在AD+MF组显着降低,14d在AD和AD+MF组均显着增高。p-NF-κB——6h MF组表达显着增加但AD+MF组表达较AD组显着减少;7及14d各组达均显着增加,其中AD+MF组更高于AD组;28d仅见AD组仍然高于对照。RKIP与TAK1相互作用——6h28d,AD组均显着减弱,MF组则表现为减弱→增强→再次减弱→再次增强的改变;与AD组比较,AD+MF组均显着增强。（7）PC12细胞病理改变:3h,C组细胞折光性良好突起丰富,各实验组均可见不同程度的折光性变差且突起减少;透射电镜下MF组可见核型不整,细胞器空泡样变,AD组凋亡发生并伴大量脂褐素沉积,AD+MF病变与AD组类似但程度较轻,病变细胞数量较少。（8）PC12细胞增殖和凋亡改变:MTT——312h,MF组增殖活力持续增高,AD组与C组比较则明显呈抑制状态。AD+MF组增殖活力在暴露终止3、6h,与C组未见显着差异,但12h时明显降低。AO/EB——312h各组凋亡率均显着高于对照,其中6h、12h可见AD+MF组凋亡率显着低于AD组。流式细胞术——312h,MF及AD组凋亡率均显着增高;其中6h、12h可见AD+MF组凋亡率显着低于AD组。（9）PC12细胞凋亡通路相关蛋白表达改变:Fas——3h在Aβ及AD+MF组显着上调,12h仅在AD组显着上调。TNFR1——仅于3h及6h在AD组显着增加。Caspase8——312h在Aβ及AD+MF组均呈上调趋势,其中以3h为显着。Caspase3——3h、6h各组均显着增加,12h仅AD组仍未见恢复。Cyt C——312h各组均显着增高,6h12h MF组恢复,同时可见AD+MF组均显着低于AD组并与对照无差异。Bax、Bcl-2——3h,AD组Bax显着上调,同时AD+MF组Bcl-2表达显着高于AD组;12h,AD+MF组Bax表达显着低于AD组。3h、6h,AD组Bcl-2/Bax比值显着低于对照,但AD+MF组显着高于AD组。结论1、成功研制了动物及细胞PF-MF暴露实验装置,并应用该两种装置分别成功建立了PF-MF暴露联合AD大鼠模型和AD神经细胞模型。2、PF-MF暴露（50Hz-400u T 60d）可导致正常动物学习记忆功能和海马形态结构发生可恢复性损伤;PF-MF暴露（50Hz-100u T 24h）可促进正常神经细胞增殖同时增加其凋亡。3、PF-MF暴露（50Hz-400u T 60d）可改善AD动物学习记忆功能障碍,减轻海马形态结构损伤;PF-MF暴露（50Hz-100u T 24h）可促进AD细胞增殖,并抑制其凋亡。4、PF-MF延缓AD发生发展,减轻其功能结构和损伤的机制:（1）上调SNAP25、UCHL1、EFHD2、MBP表达,促进突触生长并改善神经元损伤;（2）上调RKIP及TAK1表达同时增加二者相互作用,抑制IKK磷酸化,进而抑制由NF-κB通路过度活化所致炎性损伤;（3）下调Caspase3、Cyt C、Bax表达,并上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡。上述机制提示,PF-MF改善AD病理生理损伤是多因素多途径综合作用的结果。综上,本研究通过整体实验与离体实验,明确了PF-MF暴露具有改善AD损伤的作用,并初步探讨了其分子机制,为AD防治提供新思路,具一定理论意义和潜在应用价值。
王云[8]（2015）在《模拟航天复合环境对大鼠精神行为相关的蛋白质组学研究》文中研究指明随着载人航天发展及空间站相关任务的持续推进,要求航天员在轨驻留的时间越来越长。在长期的太空飞行中,航天员由于所处的特殊环境,包括微重力、噪声、生物节律改变和狭小空间等,都会对航天员的心理、生理等身心健康产生一定的影响,从而影响其工作能力的发挥。因此,为确保航天员在长期空间飞行中健康、安全和高效的工作而开展的相关研究已成为航天医学领域的研究热点和难点。目前,航天复合环境对航天员机体和脑功能影响的研究相对滞后。针对上述问题以及未来航天发展的需求,从航天复合环境对精神行为影响的角度出发,建立航天复合环境下大鼠模型,采用精神行为学实验指标、定量蛋白质组学和质谱多反应监测技术,从蛋白整体水平研究并阐明航天复合环境对航天员脑功能的影响具有十分重要的意义。本研究通过模拟微重力环境和航天复合环境两个层次的太空飞行环境,从行为学、海马线粒体蛋白、海马细胞膜蛋白和神经递质等四个方面,对两种环境下对大鼠海马的影响进行评价,为探讨太空复合环境对航天员的精神健康影响提供科学数据。本论文主要研究内容分为二个层面。一方面,建立单独模拟微重力效应的大鼠模型,监测大鼠脑内生理生化指标的变化情况,并结合18O标记的定量蛋白质组学技术,鉴定模型组和对照组大鼠海马细胞膜及线粒体的差异蛋白,探讨模拟微重力效应对大鼠精神行为影响的作用机制。另一方面,建立模拟航天复合环境（模拟微重力,噪声,生物节律改变,狭小空间）多重因素影响的大鼠模型,探索该模型对大鼠精神行为的影响,利用18O标记和非标的“SWATH定量”蛋白质组学技术,从蛋白水平揭示航天复合环境对大鼠海马脑区的影响。综合两个层次的工作,本研究取得了以下几个成果:1成功建立了中长期模拟微重力效应的大鼠模型并进行了模型评价。采用大鼠吊尾21天模型模拟中长期微重力效应,通过对动物进行日均摄食、体重和行为学分析,发现模拟中长期微重力下模型组大鼠的日均摄食和体重较正常组分别变化0.51%和0.75%,可以真实地模拟微重力效应,提示模型构建成功。在糖水实验中模拟微重力组糖水偏爱率与对照组无显着性差异（p>0.05）,强迫游泳静止飘浮时间无显着性差异（p>0.05）,而模拟跨格次数和直立次数显着低于对照组（p<0.05）。中央格停留时间明显减少（p<0.05）,自我修饰和粪便颗粒明显增多（p<0.05）,表明模拟微重力21天使大鼠产生一定程度的焦虑。吊尾21天大鼠海马的脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde,mda）和过氧化氢（h2o2）含量与正常组相比明显升高,而超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,sod）的含量与正常组相比明显降低（p<0.05）,表明中长期模拟微重力效应下大鼠海马出现了氧化应激。因此,可以大鼠的平均日摄食、体重和氧化应激的指标变化进行中长期模拟微重力的模型评价。2从蛋白层面上进一步确证了中长期模拟微重力效应产生氧化应激的损伤并使能量代谢发生紊乱。采用18o标记的定量蛋白质组学分析大鼠海马线粒体蛋白的变化,当肽段假阳性率fdr<1%,肽段得分spi=15时,共鉴定到679个蛋白,其中差异蛋白42个,上调21个,下调21个。这些差异蛋白主要富集在（1）氧化磷酸化过程受损（线粒体复合体i、iii和iv的蛋白表达下调）;（2）三羧酸循环（tca）催化过程受损（异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶表达下调）;（3）脂肪酸的氧化紊乱（长链脂肪酸辅酶a连接蛋白亚基6表达上调、极长链乙酰辅酶a脱氢酶、乙酰辅酶a合成酶家族蛋白2和脂肪酸酰胺水解酶表达下调）。部分蛋白在已有的微重力研究中未被报道过。同时抗氧化蛋白dj-1和过氧化物氧化还原酶6表达上调,可能与细胞内的代偿效应相关。westernblot验证了dj-1和cox5a的表达,与质谱结果一致。3模拟微重力影响了大鼠海马神经递质的释放和清除,兴奋性递质谷氨酸浓度过度升高,抑制性递质r-氨基丁酸合成减弱,可能对神经元产生一定的毒性损伤。采用18o标记的定量蛋白质组分析了大鼠海马细胞膜蛋白的变化,当肽段fdr<1%,spi=15时,共鉴定到863个蛋白,其中差异蛋白53个,上调31个,下调22个。这些差异蛋白主要富集在（1）snare复合体形成受到干扰（囊泡相关膜蛋白3和突触融合蛋白-1a表达下调）;（2）突触囊泡回收受到影响（突触融合蛋白-结合蛋白5和小g蛋白rab3a表达下调,效应分子rim2表达上调）;（3）突触间隙的谷氨酸清除受到影响（神经胶质细胞的谷氨酸的转运体1表达下调,囊泡谷氨酸转运蛋白1和2表达上调）;（4）氨基丁酸合成受到影响（谷氨酸脱羧酶1和谷氨酸脱羧酶2表达下调）。蛋白质组学结果提示谷氨酸的清除和r-氨基丁酸的合成受到影响。而兴奋性谷氨酸过度增加和抑制性r-氨基丁酸过度减弱均会给神经元造成损伤。同时,以质谱多反应监测（multiplereactionmonitoring,mrm）的方法分析了脑内神经递质的含量,结果发现中长期微重力组大鼠海马兴奋性神经递质谷氨酸浓度101.60μg/mg较正常组85.29μg/mg明显升高（p<0.05）,而抑制性神经递质r-氨基丁酸27.69μg/mg与正常组37.64μg/mg相比明显下降（p<0.05）,这一结果和谷氨酸转运体和谷氨酸脱羧酶的变化趋势一致,进一步证实模拟微重力影响了大鼠海马神经递质的释放和清除过程。westernblot验证了psd-95的表达,与质谱结果一致。4成功建立了模拟航天复合环境的大鼠模型并进行了模型评价。在21天吊尾模型的基础上复合噪声（65db）,生物节律改变（1.5h）及狭小空间三个因素模拟航天员长期航天飞行中所处的复杂舱室环境,对动物进行日均摄食、体重和行为学分析,发现模拟航天复合环境下模型组大鼠的日均摄食量与对照组相比减少4.2%,体重与对照组相比减少5.9%。模拟航天复合环境下模型组大鼠在糖水实验中其糖水偏爱率与对照组相比明显降低（p<0.05）,强迫游泳静止飘浮时间显着减少（p<0.05）,模型组动物在旷场实验中跨格次数与直立次数也明显减少（p<0.05）,中央停留的时间也明显低于对照组（p<0.05）,而自我修饰和粪便颗粒数明显高于对照组（p<0.05）,表明模拟航天复合环境下大鼠情绪出现了抑郁样改变。5模拟航天复合环境下大鼠海马线粒体能量代谢出现紊乱。采用18o标记的差异蛋白质组学,对模拟航天复合环境模型大鼠海马线粒体进行差异蛋白质组学分析,结果显示当肽段fdr<1%,spi=15时,共鉴定到515个蛋白,其中差异蛋白89个,12个蛋白表达上调,77个蛋白表达下调。发现这些差异蛋白主要富集在氧化磷酸化（线粒体复合体i、iii和v的蛋白均表达下调）和三羧酸循环（丙酮酸脱氢酶复合体的亚基和乌头酸水合酶表达下调）的生物学过程。6模拟航天复合环境影响了大鼠海马的内质网蛋白加工、突触的囊泡转运和神经突触传递过程,兴奋性递质谷氨酸浓度增加,抑制性递质r-氨基丁酸减少,可能对神经元产生一定的毒性损伤。采用非标的swath定量蛋白质组学方法,对模拟航天复合环境大鼠模型中海马细胞膜蛋白进行差异蛋白质组学分析。当肽段<1%fdr时,共鉴定到4520个定量蛋白。其中差异蛋白1112个蛋白,812个蛋白表达上调,300个蛋白表达下调。发现模拟航天复合环境影响了与sec61、sec62等蛋白相关的内质网蛋白加工过程,与ap180、ap2激酶、dynamin-1、clathrin-lightchain等蛋白相关的突触的囊泡转运和与psd-95、neurexin2、neuroligin-1等蛋白相关的神经突触传递过程。通过质谱mrm方法发现模拟航天环境组大鼠海马兴奋性神经递质谷氨酸浓度154.38μg/mg较正常组85.68μg/mg明显升高（p<0.05）,而抑制性神经递质r-氨基丁酸15.42μg/mg与正常组36.44μg/mg相比明显下降（p<0.05）。这些变化均提示模拟航天复合环境可能会对大鼠海马神经元产生一定的损伤。westernblot验证了gsk-3的表达,与质谱结果一致。7模拟航天复合环境对大鼠脑神经的影响较单独模拟微重力的环境相比,影响更为严重。从行为学、海马线粒体蛋白、海马细胞膜蛋白和神经递质等四个方面对以上两种环境下大鼠的精神行为进行评价,发现航天复合环境对大鼠海马的影响更为严重。综上所述,本研究针对载人航天发展的未来需求,以提升航天员的适应能力、决策能力为目标,通过模拟两个层次的太空飞行环境,即单独模拟微重力环境和航天复合环境,建立了模拟航天复合环境对精神行为复合因素影响的动物模型,并结合蛋白质组学相关技术,探寻航天复合环境对人的精神行为影响的重要分子机制,为未来航天复合环境设计,改善航天员保护措施提供基础研究数据。这项研究同时也对地球上精神类疾病发病机制的探讨具有重要意义。
吉云鹏[9]（2015）在《补肾治法对肾虚大鼠海马神经干细胞增殖机制的研究》文中提出目的：本研究从在体实验方面展开,通过建立肾虚大鼠模型并用补肾治法进行干预,从动物行为学、组织形态学和分子生物学等多角度多层面,观察肾虚大鼠海马神经干细胞的增殖变化情况和补肾治法的干预作用,探讨肾主藏精的功能与海马神经干细胞增殖的内在关系,以及补肾治法对神经干细胞增殖分化作用机制,并为中医药结合现代干细胞技术在治疗临床重大疑难疾病提供理论与实验依据。方法：一、理论研究通过对相关文献的梳理,讨论中医肾主藏精与干细胞的增殖分化的关系及影响神经干细胞增殖分化的因素。二、实验研究采用单纯房室不节（雌雄比例5：1合笼30天）、长期房室不节（雌雄比例2：1合笼6个月）、“房室不节,劳倦过度”（雌雄比例5：1合笼,并结合1小时强迫游泳,30天）及灌胃腺嘌呤不同造模方法制备肾虚大鼠模型。通过观察Morris水迷宫实验及组织形态学等指标变化,评价不同造模方法制备的肾虚大鼠模型质量,为进一步研究提供理想的肾虚动物模型。观察补肾治法对肾虚模型大鼠的空间学习记忆能力及海马组织形态学的影响；补肾治法对肾虚模型大鼠海马DG区细胞超微结构及增殖凋亡相关蛋白表达的影响；补肾治法对肾虚模型大鼠海马DG区细胞β-catenin、Wntl、CyclinDl和c-Myc表达的影响。结果：一、理论研究中医肾主藏精与干细胞的增殖分化存在相关性,补肾方药对干细胞的增殖和分化均有一定的干预效应。二、实验研究（一）补肾治法对单纯房室不节肾虚大鼠的空间学习记忆能力的影响Morris水迷宫定位航行实验中,组间两两比较,与正常对照组比较,肾虚模型组潜伏期明显延长（P<0.01,P<0.05）；与肾虚模型组比较,艾灸肾俞穴组潜伏期明显缩短（P<0.05）；与艾灸肾俞穴组比较,六味地黄丸低剂量组和六味地黄丸高剂量组大鼠逃避潜伏期明显延长（P<0.01,P<0.05）。空间探索实验中,大鼠入水后前20s,与正常对照组相比,肾虚模型组穿越原平台区域次数和平台周围区域一时间均有所减少,但无统计学意义；与肾虚模型组比较,六味地黄丸高剂量组大鼠穿越原平台区域次数明显提高（P<0.05）,艾灸肾俞穴组虽有所增长,但差异无统计学意义,六味地黄丸高剂量组和艾灸肾俞穴组大鼠平台周围区域一时间均明显提高（P<0.05）；与六味地黄丸低剂量组比较,六味地黄丸高剂量组和艾灸肾俞穴组穿越原平台区域次数和平台周围区域一时间明显延长（P<0.01,P<0.05）。（二）补肾治法对长期房室不节肾虚大鼠海马DG区细胞生长变化的影响1. Morris水迷宫实验结果定位航行实验中与正常对照组比较,肾虚模型组潜伏期明显延长（P<0.01）；与肾虚模型组比较,其余各干预组潜伏期明显缩短（P<0.01,P<0.05）；各干预组间无显着性差异。空间探索实验中,入水后20s和60s内,与正常对照组相比,肾虚模型组原平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间明显减少（P<0.01,P<0.05）；与肾虚模型组相比,金匮肾气丸高剂量组平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间明显增加（P<0.05）。入水后60s内,六味地黄丸低剂量组平台周边区域一停留时间明显增加（P<0.05）；与金匮肾气丸高剂量组相比,金匮肾气丸低剂量组和艾灸肾俞穴组平台周边区域一停留时间明显减少（P<0.01,P<0.05）。2.各组大鼠海马DG区细胞超微结构变化电镜检测结果肾虚模型组大鼠海马DG区发生细胞超微结构损伤,主要表现为神经微丝和微管结构有明显的溶解,线粒体发生明显的空泡变性。各干预组海马DG区发生细胞超微结构损伤不同程度的减轻。其中,以金匮肾气丸高剂量组情况最佳。3.各组大鼠海马DG区免疫组织化学检测结果与正常对照组比较,肾虚模型组大鼠海马DG区细胞β-catenin、NeuN、PCNA表达均明显减少（P<0.01,P<0.05）,TUNEL表达均明显增加,与肾虚模型组比较,艾灸肾俞穴组大鼠海马DG区细胞NeuN、PCNA表达均明显增加（P<0.05）,其余各用药组大鼠海马DG区细胞β-catenin、NeuN、PCNA表达均明显增加（P<0.01,P<0.05）,TUNEL表达均明显减少（P<0.01,P<0.05）；高剂量组疗效优于低剂量组,药物组疗效优于艾灸组。（三）补肾治法对“房室不节,劳倦过度”肾虚大鼠海马DG区细胞生长变化的影响1. Morris水迷宫实验结果定位航行实验中,与正常对照组比较,腺嘌呤组和肾虚模型组潜伏期明显延长（P<0.01）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组潜伏期明显缩短（P<0.01,P<0.05）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组潜伏期明显缩短（P<0.05）；与六味地黄丸组比较,金匮肾气丸组潜伏期差异,无统计学意义。空间探索实验中,与正常对照组相比,腺嘌呤组和肾虚模型组大鼠站台穿越次数、平台周边区域一停留时间和路程明显减少（P<0.01）；与肾虚模型组相比,金匮肾气丸组大鼠站台穿越次数、平台周边区域一停留时间和路程明显增加（P<0.01,P<0.05）,六味地黄丸组大鼠站台穿越次数和路程明显增加（P<0.05）：与腺嘌呤组相比,腺嘌呤加药组站台穿越次数、平台周边区域一停留时间和路程明显增加（P<0.05）。2.各组大鼠肾、睾丸组织形态学改变肾虚模型组和腺嘌呤组大鼠肾脏和睾丸存在明显的组织形态学损伤。肾虚模型组可见肾皮质中肾小管中可见明显红染的透明管型,间质血管充血明显,局部有明显的炎性病变,周围有炎性细胞浸润。腺嘌呤组大鼠肾脏存在更严重的组织形态学损伤,主要表现为肾单位明显减少,肾小管扩张呈网状,肾小管上皮细胞变成扁平状,有些肾小管中可见脓液,里面含有炎性细胞和坏死的细胞碎片,间质中可见明显的炎性细胞浸润。各干预组肾脏的组织形态学损伤均有不同程度的减轻。肾虚模型组和腺嘌呤组大鼠睾丸曲精细管明显的萎缩,腔内生精细胞明显减少,甚至坏死。各干预组睾丸的组织形态学损伤均有不同程度的减轻。3.各组大鼠肾、睾丸免疫组织化学检测结果各组大鼠睾丸免疫组织化学检测结果可见,与正常对照组比较,肾虚模型组和腺嘌呤组大鼠睾丸细胞β-catenin表达明显减少（P<0.01）, PCNA表达虽有减少,但差异无统计学意义,TUNEL表达均明显增加（P<0.01）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组大鼠睾丸细胞β-catenin口PCNA表达均明显增加（P<0.01）,TUNEL表达均明显减少（P<0.01）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组大鼠睾丸细胞β-catenin表达明显增加（P<0.01）, PCNA表达虽有增加,但差异无统计学意义,TUNEL表达均明显减少（P<0.01）；与六味地黄丸组比较,金匮肾气丸组各项表达差异无统计学意义（P<0.05）。各组大鼠肾脏免疫组织化学检测结果可见,与正常对照组比较,腺嘌呤组大鼠肾脏PCNA表达明显减少（P< 0.01）, β-catenin表达虽有减少,但差异无统计学意义,肾虚模型组和腺嘌呤组TUNEL表达均明显增加（P<0.01）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组β-catenin表达均明显增加（P<0.01）,金匮肾气丸组虽有增加,但差异无统计学意义,六味地黄丸组和金匮肾气丸组TUNEL表达均明显减少（P<0.01）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组大鼠肾脏β-catenin和表达明显增加（P<0.01）,TUNEL表达均明显减少（P<0.01）。（四）补肾法对肾虚大鼠海马DG区细胞Wnt信号通路相关蛋白的影响1.各组海马DG区组织Western-blotting结果与正常对照组比较,肾虚模型组和腺嘌呤组Wnt1、β-catenin、c-Myc及CyclinD1蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组Wnt1、β-catenin、c-Myc及CyclinD1蛋白相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组Wnt1、β-catenin、c-Myc及CyclinDl蛋白相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。2.各组海马DG区Real-time PCR检测结果与正常对照组比较,肾虚模型组和腺嘌呤组β-catenin mRNA、CyclinD1 mRNA和c-Myc mRNA相对表达量明显降低（P<0.05, P<0.01）, Wnt1 mRNA相对表达量虽有降低,但无统计学差异；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组Wnt1mRNA、β-catenin mRNA、c-Myc mRNA及CyclinD1 mRNA相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组β-catenin mRNA、c-Myc mRNA及CyclinD1 mRNA相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论：（一）长期房室不节、房室不节结合劳倦过度及灌胃腺嘌呤均可制作理想的肾虚大鼠模型,今后可以根据实验操作需要和研究重心的不同,进行选择。（二）补肾治法可改善肾虚大鼠空间学习记忆障碍、海马DG区细胞超微结构及组织形态学病变。（三）补肾方药促进肾虚大鼠海马DG区神经干细胞增殖,其作用机制可能是上调肾虚大鼠海马DG区细胞Wntl表达,激活经典Wnt信号通路,导致胞内β-catenin大量聚集,上调下游靶基因c-Myc和Cyclin D1表达,启动靶基因转录,促进海马神经干细胞增殖。（四）中医肾精与海马神经干细胞可能存在某种程度上的联系,肾主藏精的功能体现在促进干细胞的增殖,补肾治法可能通过激活经典Wnt信号转导通路调控干细胞的增殖。创新点：（一）提出新的假说：肾主藏精的功能主要表现在干细胞的保有与增殖,补肾治法主要通过激活经典Wnt信号转导通路调控干细胞的增殖。（二）通过在体实验,从干细胞的增殖调控角度来探讨肾主藏精的内涵,为中医肾藏象理论的研究与发展提供新的思路与实验依据,为补肾治法结合干细胞技术治疗神经系统疾病提供理论和实验依据。
熊璐[10]（2014）在《miR-219调控NMDAR信号通路在微波辐射致突触可塑性损伤中的作用研究》文中认为目的和意义：微波技术在给人们带来极大益处的同时，其生物危害越来越受到关注，可造成包括突触可塑性在内的脑损伤，但致伤机制未明。miRNA是一类单链小分子RNA，具有非常广泛的生物功能，可通过对NMDAR通路的调节影响突触可塑性，但其在微波辐射损伤中的作用研究尚属空白。因此，本研究为深入认识微波辐射致突触可塑性损伤的分子机制、探寻生物标志物和防治靶标提供新思路。材料与方法：（1）采用0和30mW/cm2微波辐射Wistar雄性大鼠48只，隔日辐射1次,共3次，10min/次，于末次辐射后1、7、14和28d，采用光镜、透射电镜观察大鼠海马组织及超微结构。Western Blot检测大鼠海马组织中NMDAR信号通路相关分子NR1、NR2A、NR2B、CaMKIIγ、CREB及p-CREB蛋白；Real-time PCR检测海马组织NR1、NR2A、NR2B mRNA及miR-219；原位杂交检测海马组织中miR-219分布特点。（2）采用0和30mW/cm2微波辐射经NGF诱导的PC12细胞，于辐射后即刻或6h采用原子力显微镜、扫描电镜、HPLC、免疫荧光及流式细胞术等手段检测突触结构及功能改变；于辐射后1h、6h、12h和24h采用Western Blot检测PC12细胞NMDAR信号通路中相关分子NR1、NR2A、NR2B、CaMKIIγ、CREB及p-CREB蛋白；于辐射后1h、6h、12h和24h采用Real-time PCR检测PC12细胞中NR1、NR2A、NR2B mRNA及miR-219的表达。（3）利用靶基因预测数据库（TargetScan、miRanda和miRDB）对miR-219靶基因进行预测，通过Gene Ontology （GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes （KEGG）分别对靶基因进行功能分类和通路分析；双荧光素酶活性分析确认miR-219靶基因；稳定转染miR-219过表达和沉默载体至PC12细胞，WesternBlot检测微波辐射后6h miR-219靶基因CaMKIIγ及NMDAR通路分子NR1、NR2A、NR2B、CREB及p-CREB的表达变化。实验结果：（1）大鼠海马组织及超微结构改变：辐射后1d，大鼠海马组织部分神经元固缩、深染，细胞周间隙增宽；辐射后7d，上述损伤加重，突触间隙不清，囊泡减少，线粒体肿胀、空化；辐射后14d，上述改变呈恢复趋势，至28d基本恢复正常；（2）大鼠海马组织中miR-219分布及表达变化：假辐射组miR-219主要分布于海马颗粒细胞和锥体细胞的胞浆和胞核；辐射后7d，miR-219于上述部位减少（P<0.05或P<0.01），14d未见明显改变；（3）大鼠海马组织NMDAR通路分子表达变化：辐射后1d，NR1、NR2A、NR2B及CaMKIIγ蛋白表达均见增加（P<0.05），辐射后7d p-CREB蛋白表达减少（P<0.05），NR2A和NR2B mRNA表达上调（P<0.05或P<0.01）；（4）突触可塑性损伤细胞模型建立：辐射后6h可见PC12细胞突起缩短、减少，突触表面粗糙不平；Gly、Glu和GABA释放减少（P<0.05），Glu/GABA比值增加（P<0.05）；辐射后即刻可见细胞内Ca2+增加（P<0.01）；（5）PC12细胞NMDAR通路分子表达变化：辐射后1h和6h, NR1、NR2A、NR2B、CaMKIIγ及p-CREB表达均见增加（P<0.05），NR1、NR2A和NR2B mRNA表达上调（P<0.05或P<0.01）；（6）PC12细胞miR-219变化：辐射后6h及12h可见miR-219下调（P<0.05或P<0.01）；（7）miR-219靶基因预测及功能分析：共预测到14个miR-219靶基因，涉及到与突触可塑性相关的生物过程包括钙离子转运、神经递质转运、谷氨酸分泌、长时程增强和长时程抑制等，7个预测出的miR-219靶基因涉及到与突触可塑性相关的通路（；8）miR-219靶基因确认：经Dual-luciferase确认CaMKIIγ为miR-219靶基因（P<0.05）；（9）miR-219与靶基因CaMKIIγ相互作用，及对NMDAR通路分子表达的影响：辐射后6h，miR-219过表达组CaMKIIγ、NR1、NR2A和p-CREB表达显着降低（P<0.05），miR-219沉默组CaMKIIγ、NR1和p-CREB表达显着增加（P<0.05或P<0.01）。结论：（1）30mW/cm2微波辐射可使大鼠海马组织尤其是突触可塑性损伤；NMDAR通路活化参与微波辐射致突触可塑性损伤的病理生理过程。（2）预测到14个与微波辐射致突触可塑性损伤相关的miR-219靶基因，其中7个参与突触可塑性相关信号通路；30mW/cm2微波辐射后miR-219下调可能通过增加靶基因表达促进突触可塑性损伤。（3）30mW/cm2微波辐射可致PC12细胞突触可塑性损伤；微波辐射后miR-219下调可通过增加靶基因CaMKIIγ表达，增强NMDAR信号通路活化，可能是微波辐射造成突触可塑性损伤的重要机制。
二、锰对大鼠海马神经微丝蛋白表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、锰对大鼠海马神经微丝蛋白表达的影响（论文提纲范文）
（1）海马miR-181c在CCI大鼠神经痛中的作用及其表达调控机制的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 海马miR-181c通过下调TLR4和TNF-α缓解CCI大鼠神经痛 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 海马注射PDTC对 CCI大鼠miR-181c表达的影响 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文小结及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）低频电针对SAMP8小鼠海马Tau蛋白磷酸化及微管相关蛋白MAP2的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 实验研究 |
| 实验一 低频电针对SAMP8小鼠行为学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 低频电针对SAMP8小鼠海马轴突超微结构的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 低频电针对SAMP8小鼠海马齿状回PHF1表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验四 低频电针对SAMP8小鼠海马Tau蛋白磷酸化及微管相关蛋白MAP2的影响研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 腧穴及干预方式的选择 |
| 2 模型的选择及评价 |
| 3 海马DG区在学习记忆中的作用 |
| 4 实验结果分析 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.不足与展望 |
| 综述一:针灸治疗阿尔茨海默病的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二:微管相关蛋白与阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎脑脊液神经微丝蛋白研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 现代医学研究概况 |
| 1.1.1 抗NMDA受体脑炎起源及发展 |
| 1.1.2 抗NMDA受体脑炎的病因及发病机制研究 |
| 1.1.3 抗NMDA受体脑炎的流行病学 |
| 1.1.4 抗NMDA受体脑炎的症状研究及临床评估 |
| 1.1.5 抗NMDA受体脑炎的疾病诊断 |
| 1.1.6 抗NMDA受体脑炎的治疗及预后 |
| 1.2 中医研究概况 |
| 1.2.1 抗NMDA脑炎与中医癫狂 |
| 1.2.2 抗NMDA脑炎与中医积聚 |
| 1.2.3 疾病转归与预后 |
| 1.2.4 中西医结合治疗疾病 |
| 第二章 抗NMDA受体脑炎患者脑脊液中神经丝蛋白水平的研究 |
| 2.1 背景 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 主要仪器和试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 临床资料收集 |
| 2.3.2 样本收集与储存 |
| 2.3.3 脑脊液样本中Nfs蛋白及细胞炎症因子浓度检测 |
| 2.3.4 数据处理 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 一般临床资料 |
| 2.4.2 临床症状 |
| 2.4.3 ELISA实验标准曲线 |
| 2.4.4 神经微丝蛋白和炎症因子的组间比较 |
| 2.4.5 抗NMDA受体脑炎患者治疗前后神经微丝蛋白和炎症因子浓度的变化 |
| 2.4.6 神经微丝蛋白与炎症因子浓度的相关性 |
| 2.4.7 神经微丝蛋白与mRS的相关性 |
| 2.4.8 神经微丝蛋白、炎症因子浓度下降程度与mRS评分减少幅度的相关性 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 不同组患者脑脊液中Nf-L和pNf-H浓度的比较 |
| 2.5.2 神经微丝蛋白与炎症因子浓度的关系 |
| 2.5.3 急性期和随访期Nf-L、Nf-H及炎症因子的变化 |
| 2.5.4 神经微丝蛋白、炎症因子浓度与mRS评分的关系 |
| 2.6 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
| 附件 |
（4）PAS-Na对ERS-Txnip/Nlrp3炎症通路介导锰神经毒性的干预研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 英文缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 PAS-Na对ERS-Txnip/Nlrp3炎症通路介导锰神经毒性的体外干预研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养及传代 |
| 2.2 细胞药物处理染毒 |
| 2.3 荧光定量PCR |
| 2.4 Western Blot实验 |
| 2.5 Elisa实验 |
| 2.6 细胞ROS检测 |
| 2.7 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同浓度锰、PAS-Na暴露对HAPI细胞存活率的影响 |
| 3.2 PAS-Na对染锰HAPI细胞凋亡相关基因表达的影响 |
| 3.3 PAS-Na对染锰HAPI细胞炎症因子释放的影响 |
| 3.4 PAS-Na对染锰HAPI细胞炎症小体表达的影响 |
| 3.5 PAS-Na对染锰HAPI细胞氧化损伤的影响 |
| 3.6 PAS-Na对染锰HAPI细胞IRE1表达的影响 |
| 3.7 TUDCA对染锰HAPI细胞Txnip/Nlrp3信号通路的影响 |
| 3.8 Resveratrol对染锰HAPI细胞Txnip/Nlrp3信号通路的影响 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 PAS-Na对ERS-Txnip/Nlrp3炎症通路介导锰神经毒性的体内干预研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物饲养 |
| 2.2 大鼠学习记忆能力测试 |
| 2.3 大鼠样本的采集与处理 |
| 2.4 大鼠海马超微结构观察 |
| 2.5 免疫组化 |
| 2.6 相关元素含量测定 |
| 2.7 荧光定量PCR |
| 2.8 Western Blot实验 |
| 2.9 Elisa实验 |
| 2.10 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 染锰对大鼠生长发育的影响及PAS-Na的干预作用 |
| 3.2 染锰对大鼠血、脑锰的影响及PAS-Na的干预作用 |
| 3.3 PAS-Na对染锰大鼠学习记忆的影响 |
| 3.4 PAS-Na对染锰大鼠海马损伤的影响 |
| 3.5 PAS-Na对染锰大鼠海马炎症因子表达的影响 |
| 3.6 PAS-Na对染锰大鼠海马炎症小体表达的影响 |
| 3.7 PAS-Na对染锰大鼠海马氧化损伤的影响 |
| 3.8 PAS-Na对染锰大鼠海马Txnip表达的影响 |
| 3.9 PAS-Na对染锰大鼠海马IRE1表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 总结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表论文 |
（5）N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型泛连接蛋白-1表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及主要试剂 |
| 1.3 主要培养液的配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 与海马神经元培养 |
| 1.6 海马神经元鉴定 |
| 1.7 大鼠海马神经元癫痫样放电模型的建立及给药 |
| 1.8 CCK-8检测神经元细胞活力 |
| 1.9 TUNEL法 |
| 1.1 0 流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法 |
| 1.1 1 蛋白质印迹法 (Western印迹) 检测神经元Panx-1的表达 |
| 1.1 2 实时荧光定量PCR (Real Time-PCR) 检测神经元Panx-1mRNA的表达 |
| 1.1 3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 海马神经元鉴定结果 |
| 2.2 CCK-8检测结果 |
| 2.3 NMDA受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型神经元凋亡的影响 |
| 2.3.1 TUNEL染色检测结果 |
| 2.3.2 AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测结果 |
| 2.4 NMDA受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型Panx-1表达的影响 |
| 2.5 NMDA受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型神经元Panx-1 mRNA表达的影响 |
| 3 讨论 |
（6）PAS-Na对染锰大鼠脑炎症反应的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 主要仪器 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 实验动物分组、染锰及PAS-Na治疗 |
| 1.3 动物样本的采集及处理 |
| 1.3.1 全血和血清的采集及处理 |
| 1.3.2 大鼠脑组织和脏器的采集及处理 |
| 1.3.3 大鼠海马免疫组化法样本的采集及处理 |
| 1.4 指标测定 |
| 1.4.1 体重测定 |
| 1.4.2 脏体系数测定 |
| 1.4.3 学习记忆能力测试 |
| 1.4.4 定位航行实验 |
| 1.4.5 空间探索实验 |
| 1.5 石墨炉原子吸收分光光度法（AAS）测定血锰和脑锰浓度 |
| 1.5.1 配制溶液 |
| 1.5.2 样品配制及测定 |
| 1.5.3 石墨炉工作条件 |
| 1.5.4 样品加标回收率： |
| 1.6 使免疫组织化学法检测脑组织GFAP、bcl-2、bax和caspase3阳性细胞表达 |
| 1.6.1 免疫组化学按照以下步骤进行： |
| 1.6.2 细胞计数及观察 |
| 1.6.3 ELISA测定血清、脑组织炎症因子含量 |
| 1.7 RT-PCR测定炎症因子m RNA表达 |
| 1.7.1 RNA提取 |
| 1.7.2 RNA逆转录（cDNA第一链的合成） |
| 1.7.3 引物设计及合成 |
| 1.7.4 Real-time PCR（RT-PCR） |
| 1.7.5 Ct值计算 |
| 1.8 Western-blot实验检测脑组织MAPK通路相关蛋白表达 |
| 2. 统计学处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 PAS-Na对染锰大鼠生长发育的影响 |
| 3.1.1 染锰大鼠一般表现 |
| 3.1.2 染锰大鼠体重增长情况 |
| 3.1.3 PAS-Na对染锰大鼠脏器系数的影响 |
| 3.2 PAS-Na对染锰大鼠学习记忆能力的影响 |
| 3.2.1 PAS-Na对染锰大鼠平均逃避潜伏期的影响 |
| 3.2.2 PAS-Na对染锰大鼠游泳路程的影响 |
| 3.2.3 PAS-Na对染锰大鼠空间记忆能力的影响 |
| 3.3 PAS-Na对染锰大鼠血锰和脑锰浓度的影响 |
| 3.3.1 PAS-Na对染锰大鼠血锰浓度的影响 |
| 3.3.2 PAS-Na对染锰大鼠丘脑锰浓度的影响 |
| 3.3.3 PAS-Na对染锰大鼠海马锰浓度的影响 |
| 3.3.4 PAS-Na对染锰大鼠皮层锰浓度的影响 |
| 3.4 PAS-Na对染锰大鼠GFAP阳性细胞数的影响 |
| 3.4.1 PAS-Na对染锰大鼠丘脑GFAP阳性细胞数的影响 |
| 3.4.2 PAS-Na对染锰大鼠海马GFAP阳性细胞数的影响 |
| 3.4.3 PAS-Na对染锰大鼠皮层GFAP阳性细胞数的影响 |
| 3.5 PAS-Na对染锰大鼠bax、bcl-2 和caspase-3阳性细胞数的影响 |
| 3.5.1 PAS-Na对染锰大鼠丘脑bax、bcl-2 和caspase-3阳性细胞数的影响 |
| 3.5.2 PAS-Na对染锰大鼠海马bax、bcl-2 和caspase-3阳性细胞数的影响 |
| 3.5.3 PAS-Na对染锰大鼠皮层bax、bcl-2 和caspase-3阳性细胞数的影响 |
| 3.6 PAS-Na对染锰大鼠炎症因子含量的影响 |
| 3.6.1 PAS-Na对染锰大鼠血清炎症因子含量的影响 |
| 3.6.2 PAS-Na对染锰大鼠丘脑炎症因子含量的影响 |
| 3.6.3 PAS-Na对染锰大鼠海马炎症因子含量的影响 |
| 3.6.4 PAS-Na对染锰大鼠皮层症因子含量的影响 |
| 3.7 PAS-Na对染锰大鼠炎症因子m RNA表达的影响 |
| 3.7.1 PAS-Na对染锰大鼠丘脑IL-1β、IL-6、COX-2 和TNF-αmRNA表达的影响 |
| 3.7.2 PAS-Na对染锰大鼠海马IL-1β、IL-6、COX-2 和TNF-αmRNA表达的影响 |
| 3.7.3 PAS-Na对染锰大鼠皮层IL-1β、IL-6、COX-2 和TNF-αmRNA表达的影响 |
| 3.8 PAS-Na对染锰引起MAPK通路相关蛋白表达改变的影响 |
| 3.8.1 PAS-Na对染锰引起丘脑MAPK通路相关蛋白表达改变的影响 |
| 3.8.2 PAS-Na对染锰引起海马MAPK通路相关蛋白表达改变的影响 |
| 3.8.3 PAS-Na对染锰引起皮层MAPK通路相关蛋白表达改变的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 PAS-Na对染锰大鼠生长发育的影响 |
| 4.2 PAS-Na对染锰大鼠血锰浓度的影响 |
| 4.3 PAS-Na对染锰大鼠学习记忆能力的影响 |
| 4.4 PAS-Na对染锰大鼠脑GFAP、bax、bcl-2 和caspese表达的影响 |
| 4.5 PAS-Na对染锰大鼠脑炎症反应的影响 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表论文 |
（7）工频磁场对阿尔茨海默病发生的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 略缩词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 PF-MF暴露对AD发生的影响 |
| 第一节 PF-MF暴露对AD大鼠学习记忆功能的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二节 PF-MF暴露对AD大鼠海马形态结构的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第三节 PF-MF暴露对AD大鼠海马及脑脊液AD标志物的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第四节 PF-MF暴露对AD细胞模型增殖和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第一部分 讨论 |
| 第一部分 结论 |
| 第一部分 参考文献 |
| 第二部分 PF-MF暴露对AD发生影响的分子机制探讨 |
| 第一节 PF-MF暴露对AD大鼠海马蛋白质表达谱的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二节 PF-MF暴露对RKIP调控的NF-κB通路相关分子表达及相互作用的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第三节 PF-MF暴露对AD细胞凋亡相关因子表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二部分 讨论 |
| 第二部分 结论 |
| 第二部分 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附录 实验方法 |
| 一、 大鼠海马立体定位微量注射 |
| 二、 RIA |
| 三、 石蜡制片 |
| 四、 HE 染色 |
| 五、 甲苯胺蓝染色 |
| 六、 Bielschowsky 银染色 |
| 七、 透射电镜超薄制片 |
| 八、 组织及细胞总蛋白提取 |
| 九、 BCA 蛋白浓度定量 |
| 十、 双向凝胶电泳、凝胶银染色及胶内酶切 |
| 十一、 MALDI-TOF-MS 肽指纹谱鉴定 |
| 十二、 Western Blot |
| 十三、 Co-IP |
| 十四、 Elisa |
| 十五、 PC12 细胞培养 |
| 十六、 PC12 细胞 NGF 诱导及鉴定 |
| 十七、 MTT 法检测细胞增殖活力 |
| 十八、 AO/EB 法检测细胞凋亡 |
| 十九、 Annexin V-FITC/PI 染色与流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 个人简历 |
| 简要学习经历（职务） |
| 学术工作及成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（8）模拟航天复合环境对大鼠精神行为相关的蛋白质组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 空间站环境概述 |
| 1.2 空间环境因素对精神行为的影响 |
| 1.2.1 噪声和焦虑抑郁密切相关 |
| 1.2.2 狭小空间和焦虑抑郁密闭相关 |
| 1.2.3 生物节律改变和抑郁密切相关 |
| 1.2.4 微重力和焦虑密切相关 |
| 1.3 微重力的生物效应学研究现状 |
| 1.3.1 研究微重力的模型 |
| 1.3.2 微重力对生物机体的影响及作用机制的探讨 |
| 1.4 蛋白质组学的发展及其在空间环境研究中的应用 |
| 1.4.1 蛋白质组学技术发展 |
| 1.4.2 蛋白质组学在空间环境研究中的应用 |
| 1.5 课题研究基础与思路 |
| 1.5.1 研究基础 |
| 1.5.2 课题思路 |
| 第2章 实验部分 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.2.4 一抗 |
| 2.3 动物模型的建立 |
| 2.3.1 模拟微重力模型 |
| 2.3.2 模拟航天复合环境大鼠模型 |
| 2.3.3 模拟航天复合模型箱 |
| 2.4 行为学检测 |
| 2.4.1 摄食和体重 |
| 2.4.2 糖水偏爱实验 |
| 2.4.3 旷场实验 |
| 2.4.4 强迫游泳实验 |
| 2.4.5 鼠脑的取材 |
| 2.4.6 数据统计 |
| 2.5 氧化应激水平的测定 |
| 2.5.1 蛋白浓度测定 |
| 2.5.2 丙二醛（MDA）含量测定 |
| 2.5.3 过氧化氢（H_2O_2）含量测定 |
| 2.5.4 超氧化物歧化酶SOD含量测定 |
| 2.6 神经递质谷氨酸和r-氨基丁酸的含量测定 |
| 2.6.1 谷氨酸 (Glu)，r-氨基丁酸（GABA）标准品的配制 |
| 2.6.2 大鼠海马样品的制备 |
| 2.6.3 液相色谱条件 |
| 2.6.4 质谱条件 |
| 2.6.5 数据处理 |
| 2.6.6 含量测定 |
| 2.7 ~(18)O差异蛋白质组学 |
| 2.7.1 大鼠海马线粒体蛋白的提取 |
| 2.7.2 大鼠海马细胞膜蛋白的提取 |
| 2.7.3 大鼠海马线粒体蛋白的免疫印迹（western blot）验证 |
| 2.7.4 大鼠海马蛋白酶解 |
| 2.7.5 大鼠海马蛋白~(18)O标记 |
| 2.7.6 固相萃取（SPE）脱盐 |
| 2.7.7 强阳离子交换色谱（SCX）分离 |
| 2.7.8 纳升级反相液相色谱串联质谱分析 |
| 2.7.9 数据分析 |
| 2.7.10 Western blot验证 |
| 2.8 基于非标的全景式数据采集的质谱SWATH定量 |
| 2.8.1 大鼠海马细胞膜蛋白的提取 |
| 2.8.2 基于超滤辅助样品酶解 |
| 2.8.3 一维的高pH反相液相色谱分离 |
| 2.8.4 SWATH定量 |
| 2.8.5 数据分析 |
| 2.8.6 Western blot验证 |
| 第3章 结果与讨论 |
| 3.1 模拟微重力下大鼠模型的评价 |
| 3.1.1 模拟微重力下大鼠的摄食和体重评价 |
| 3.1.2 模拟微重力效应下大鼠行为学评价 |
| 3.1.4 中长期模拟微重力效应对海马氧化应激水平的影响 |
| 3.2 模拟微重力下对大鼠海马线粒体蛋白的影响 |
| 3.2.1 7天模拟微重力对大鼠海马线粒体的蛋白质组学研究 |
| 3.2.2 21天模拟微重力对大鼠海马线粒体的蛋白质组学研究 |
| 3.2.3 7天和21天模拟微重力下大鼠海马线粒体蛋白的比较 |
| 3.3 模拟微重力对大鼠海马膜蛋白影响 |
| 3.3.1 21天模拟微重力下大鼠海马膜蛋白组学研究 |
| 3.3.2 21天模拟微重力对大鼠海马谷氨酸及r-氨基丁酸的影响 |
| 3.4 模拟航天复合环境下大鼠模型的评价 |
| 3.4.1 模拟航天复合环境下对大鼠平均摄食和体重的影响 |
| 3.4.2 模拟航天复合环境下大鼠行为学评价 |
| 3.5 模拟航天复合环境下大鼠海马线粒体蛋白质的影响 |
| 3.6 模拟航天复合环境下大鼠海马细胞膜蛋白的影响 |
| 3.7 模拟航天复合环境与模拟微重力对大鼠海马蛋白的比较 |
| 3.7.1 两种环境对行为学的影响 |
| 3.7.2 两种环境对神经递质的影响 |
| 3.7.3 两种环境对海马线粒体蛋白的影响 |
| 3.7.4 两种环境对海马细胞膜蛋白的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 |
| 致谢 |
（9）补肾治法对肾虚大鼠海马神经干细胞增殖机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 肾主藏精与干细胞的增殖分化的相关性 |
| 一、中医学对肾主藏精的认识 |
| 二、干细胞的研究进展 |
| 三、精与干细胞的关系 |
| 四、肾主藏精与干细胞的增殖分化的关系 |
| 第二节 中医药对神经干细胞增殖分化的研究进展 |
| 一、神经干细胞的研究进展 |
| 二、影响神经干细胞增殖分化的因素 |
| 三、中医药对神经干细胞增殖分化的影响 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 补肾法对肾虚大鼠动物行为学及组织形态学的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 补肾法对长期房室不节肾虚大鼠动物行为学及组织形态学的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 补肾法对“房室不节,劳倦过度”肾虚大鼠海马DG区细胞生长变化的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 补肾法对肾虚大鼠海马DG区细胞Wnt信号通路的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 一、研究结论 |
| 二、创新点 |
| 三、存在主要问题 |
| 四、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（10）miR-219调控NMDAR信号通路在微波辐射致突触可塑性损伤中的作用研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 微波辐射对大鼠海马 NMDAR 信号通路和 MIR-219 影响研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 微波辐射对 PC12 细胞突触可塑性影响研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 MIR-219 对 NMDAR 信号通路调控与微波辐射致突触可塑性损伤关系研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 攻读博士学位期间发表论文及申请专利一览表 |
| 致谢 |
四、锰对大鼠海马神经微丝蛋白表达的影响（论文参考文献）
- [1]海马miR-181c在CCI大鼠神经痛中的作用及其表达调控机制的初步研究[D]. 杨帆. 遵义医科大学, 2020
- [2]低频电针对SAMP8小鼠海马Tau蛋白磷酸化及微管相关蛋白MAP2的影响研究[D]. 何瑞阳. 湖北中医药大学, 2020(12)
- [3]抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎脑脊液神经微丝蛋白研究[D]. 李家宇. 广州中医药大学, 2020(06)
- [4]PAS-Na对ERS-Txnip/Nlrp3炎症通路介导锰神经毒性的干预研究[D]. 温平镜. 广西医科大学, 2019(08)
- [5]N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型泛连接蛋白-1表达的影响[J]. 罗海龙,贾茜,姜爱英,郭艳芹,董妍,毕鹏翔. 中国老年学杂志, 2017(23)
- [6]PAS-Na对染锰大鼠脑炎症反应的影响[D]. 李少军. 广西医科大学, 2017(01)
- [7]工频磁场对阿尔茨海默病发生的影响及其机制研究[D]. 刘肖. 中国人民解放军军事医学科学院, 2016(11)
- [8]模拟航天复合环境对大鼠精神行为相关的蛋白质组学研究[D]. 王云. 北京理工大学, 2015(07)
- [9]补肾治法对肾虚大鼠海马神经干细胞增殖机制的研究[D]. 吉云鹏. 广州中医药大学, 2015(10)
- [10]miR-219调控NMDAR信号通路在微波辐射致突触可塑性损伤中的作用研究[D]. 熊璐. 中国人民解放军军事医学科学院, 2014(01)